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PAGE PAGE 1 基因工程练习题 体主要是以天然细菌质粒的各种元 件为基础重新组建的人工质粒， pBR322 质粒是较早构建的质粒载体， 其主要结构如图一所示。1． 体主要是以天然细菌质粒的各种元 件为基础重新组建的人工质粒， pBR322 质粒是较早构建的质粒载体， 其主要结构如图一所示。 构建人工质粒时要有抗性基因，以便于_ 。 pBR322 分子中有单个 EcoRⅠ限制酶作用位点，EcoRⅠ只能识别序列—GAATTC—， 并只能在 G 与 A 之间切割。若在某目的基因的两侧各有 1 个 EcoRⅠ的切点，请画出目的基因两侧被限制酶 EcoRⅠ切割后所形成的黏性末端。 pBR322 分子中另有单个的 BamHⅠ限制酶作用位点，现将经 BamHⅠ处理后的质粒与用另一种限制酶 BglⅡ处理得到的目的基因，通过 DNA 连接酶作用恢复 键， 成功地获得了重组质粒，说明 。 为了检测上述重组质粒是否导入原本无 ampR 和 tetR 的大肠杆菌，将大肠杆菌在含氨苄青霉素的培养基上培养，得到如图二的菌落。再将灭菌绒布按到培养基上，使绒布面 沾上菌落，然后将绒布按到含四环素的培养基上培养，得到如图三的结果(空圈表示与图二对照无菌落的位置)。与图三空圈相对应的图二中的菌落表现型是 ，图三结果显示，多数大肠杆菌导入的是 。 4．下图表示科学家通过基因工程培育抗虫棉时，从苏云金芽孢杆菌中提取抗虫基因“放入”棉花细胞中与棉花的 DNA 分子结合起来而发挥作用的过程示意图。请据图回答下列有关问题： 图中科学家在进行①操作时，要用同一种 分别切割目的基因和运载体， 运载体的黏性末端与目的基因DNA 片段的黏性末端就可通过 （键名）而结合， 遵循 原则。 在获得目的基因的过程中，PCR 技术相当重要。PCR 扩增反应需要在一定的缓冲溶液中加入 DNA 模板、分别与两条模板链相结合的两种 、四种脱氧核苷酸和的 DNA 聚合酶。 图中的III 是导入了目的基因的受体细胞，经培养、筛选最终获得一株有抗虫特性的转基因植株。经分析，该植株含有一个携带目的基因的 DNA 片段，因此可以把它看作是 杂合子。理论上，在该转基因植株自交产生的 F1 中，仍具有抗虫特性的植株占总数的 ，原因是 _ 上述抗虫棉植株的后代种子种植下去后，往往有很多植株不再具有抗虫性，原因是_ ，要想获得纯合体，常采用的方法是 。 科学家最初在做抗虫实验时，虽然用一定的方法已检测出棉花的植株中含有抗虫基 因，但让棉铃虫食用棉的叶片时，棉铃虫并没有被杀死，这说明 _。科学家在 研究的基础上又一次对棉花植株中的抗性基因进行了修饰，然后在让棉铃虫食用棉的叶 片，结果食用的第二天棉铃虫就死亡了 5．为扩大可耕地面积，增加粮食产量．黄河三角洲等盐碱地的开发利用备受关注。我国科学家应用耐盐基因培育出了耐盐水稻新品系。 D NA 连接酶作用于处。（填“a”或 D NA 连接酶作用于 处。（填“a”或“b ” ） 将重组DNA 分子导入水稻受体细胞的常用方法有基因枪法和 法。 由导入目的基因的水稻细胞培养成植株需要利用 技术，该技 术的核心是  和 。 探针进行分子杂交检测，又要用方法从个体水平鉴定 水稻植株的耐盐为了确定耐盐转基因水稻是否培育成功，既要用放射性同位素标记的 作 探针进行分子杂交检测，又要用 方法从个体水平鉴定 水稻植株的耐盐 性。 我国科学家利用基因工程还培育出了能抗玉米螟的抗虫玉米，生态效益显著，有人认为抗虫玉米就是无虫玉米，不必防治害虫。你是否赞成这种说法?说明理由。 6．天然酿酒酵母菌通常缺乏分解淀粉的酶类，用作发酵原料的淀粉需经一系列复杂的转化过程才能被利用。研究者从某丝状真菌中获取淀粉酶基因并转入酿酒酵母菌，获得的酿酒酵母工程菌可直接利用淀粉产生酒精。请回答下列问题：（11 分） 若要鉴定淀粉酶基因是否插入酿酒酵母菌，可采用的检测方法是 ， 该项方法要用 作探针进行检测。 采用PCR 技术可对目的基因进行体外扩增。该反应体系的主要成分应包含：扩增缓冲液(含 Mg2+)、水、4 种脱氧核苷酸、引物、 和 。假如引物都用3H 标记，从理论上计算循环 4 次，所得DNA 分子中含有 3H 标记的DNA 占 。 已知BamHⅠ与BglⅡ的识别序列及切割位点如下图所示，用这两种酶和DNA 连接酶对一段含有数个 BamHⅠ和 BglⅡ识别序列的 DNA 分子进行反复的切割、连接操作，若干循环后 序列明显增多。 基因工程只能生产自然界已存在的蛋白质， 却能生产自然界不存 在的新的蛋白质，但最终还须通过改造基因来实现，原因是 。 7