现代生物学进展现代分子生物学的若干主要进展.pptVIP

第一百五十八页，共二百零三页。 第一百五十九页，共二百零三页。 一、质粒（plasmid）载体  质粒是一种独立于染色体外的小分子环状ＤＮＡ，一般大小约106~108D，可自身复制和表达，有的质粒还带有可做为选择性标记的抗药性基因，所以质粒经过适当改选后便可成为良好的载体。  作为载体的质粒大多是由天然质粒经人工适当改造而成的，目前已有多种经改造的良好的质粒载体。 第一百二十六页，共二百零三页。 以Ampr和Tetr为选择性标记，克隆位点在这两个选择性标记的单酶切位点上。选择AmprTets或AmpsTetr的重组子。 （4363bp） 第一百二十七页，共二百零三页。 pUC系列： 是目前最常用的E.coli质粒载体。包括pUC7、 pUC8、 pUC9、 pUC12、 pUC13、 pUC18、 pUC19、pUC118、pUC119等。 优点： 分子量更小，拷贝数更高：分子量在3KB左右，拷贝数可达每细胞500~700个，因此不需要氯酶素扩增。 引入多克隆位点（multiple cloning sites, MCS）方便操作。 引入lacZ’基因方便筛选。 第一百二十八页，共二百零三页。 第一百二十九页，共二百零三页。 第一百三十页，共二百零三页。 筛选原理——α互补——兰白筛选： Lac Z’是lac Z基因