南方医大癌生物学讲义09-1 p53——抑癌基因.docxVIP

第九章（1） p53——抑癌基因 “多细胞动物都能从自身组织中清除有缺陷或者失灵的细胞，毫无疑问，高等生物自身的构成中就蕴含着死亡。哺乳动物在它们的细胞内拥有一个忠实的护卫p53蛋白，后者保证细胞机能有条不紊。如果p53认为代谢紊乱或者基因组的损伤严重到无法修复的程度，则放出信号激活细胞潜在的自杀程序凋亡，这将导致该细胞迅速死亡。” 1、p53的发现 ? 将被SV40 DNA肿瘤病毒转化的小鼠细胞注射到具有清楚遗传背景的小鼠体内时（同系宿主），宿主的免疫系统将针对只在被病毒转化的细胞中存在而正常小鼠细胞中不存在的核蛋白，产生抗体产生强烈反应，这种蛋白质称为大肿瘤(largeT, LT)?抗原，由病毒基因组的一段区域编码。大T抗原是SV40病毒产生的具有多种功能的蛋白质，用来扰乱被感染或者转化细胞的调控通路。 ? 从携带SV40诱导肿瘤的小鼠中获得的抗大T血清，早在1979年，就被用来检测在SV40转化细胞中该蛋白质的存在。这个免疫沉淀物中除了大T,?还包含一个与其相互作用的蛋白质，分子量为53~54kDa。使用p53蛋白的抗血清能在小鼠胚胎肿瘤细胞中检测到这种蛋白的存在，随后也在许多从未感染过SV40的人类和啮齿类肿瘤细胞中检测到了这种蛋白。 图9-1-1：X射线晶体衍射显示p53与SV40大T结合：SV40大T分子组装进p53同源六聚体中，它的每个组分结合到一个单独的p53?分子上，并将之束缚 ? 用只识别大T的单克隆抗体能免疫沉淀到病毒感染的细胞中存在这一53~54kDa的蛋白质，而在未被病毒感染的细胞中则检测不到。这些发现揭示了在SV40转化的细胞中表达的大T抗原能和一种新发现的蛋白质结合，这种蛋白质被命名为P53。能同时与大T及P53反应的血清可以在一些未被感染的细胞中检测到P53。值得注意的是，这些肿瘤细胞是通过非病毒机制转化的。随后的研究证实，P53来源于细胞，而不是病毒。同年，有报道称化学致癌剂转化的小鼠细胞同样表达P53,?进一步肯定了这一结论。 2、p53被认为是抑癌基因 ? p53的功能研究绕了一个很大的弯路。最初，科学家发现在大鼠胚胎成纤维细胞?(REF)?中共转染p53 cDNA?克隆和ras癌基因可以转化这些咄齿类动物的细胞。由于之前的研究发现myc可以与癌基因ras一起使咄齿类动物的细胞发生转化，这说明p53?基因可能起与癌基因myc类似的癌基因的作用。 ? 后来的研究发现事实并非如此。最初的p53 cDNA以肿瘤细胞的rnRNA为模板合成，而随后从正常细胞中获得的p53 cDNA并不能使细胞转化，反而抑制了细胞的转化。在比较了这两种cDNA?序列后发现，两者之间的区别在于一个碱基的替换，这导致了P53?蛋白中一个氨基酸的改变。 ? 这些结果显示野生型p53等位基因的实际功能是抑制细胞的增殖，当其阅读框发生点突变时，它就会获得促进细胞生长的功能。鉴于此，p53基因被认为是一个抑癌基因。p53的等位基因点突变在很多人类肿瘤细胞的基因组中广泛存在。大量研究数据显示，在30%~50%的人类肿瘤中都存在p53基因的突变。实际上，在迄今所有人类肿瘤细胞基因组中，p53是发生突变频率最高的基因，在几乎1/3的人类肿瘤中都以突变的形式存在。 图9-1-2：p53等位基因在人类肿瘤细胞中突变的频率 ? 有趣的是，随后对于p53功能的分析显示，p53并不是一种典型的抑癌基因。大多数抑癌基因在小鼠生殖细胞中以纯合子的形式失活时，将导致胚胎发育中断。这些抑癌基因似乎负调控多种类型细胞增殖来发挥作用，它们在细胞调控通路中的缺失将导致一些细胞的不正常增殖，从而中断其正常发育。 ? 与之相反的是，小鼠生殖细胞中两个p53基因拷贝的完全缺失对于绝大多数的p53-/-胚胎的发育并无明显影响。因此，p53不能被简单地认为是正常细胞发育中增殖的负调控因子。这个特点第一次提示了P53蛋白并不操纵增殖，或者非增殖信号从而持续影响细胞调控其增殖。相反，P53似乎是特异地阻止非正常细胞的出现，尤其是那些有可能发展成肿瘤的细胞。 图9-1-3：将编码Ras癌蛋白的cDNA与多种不同剪切形式的p53 cDNA共转染到大鼠胚胎成纤维细胞中：在p53缺失突变载体中（左），几乎缺失了全部的p53阅读框，只形成了很少的聚集点；在p53点突变的情况下（中），大量聚集点形成；在野生型p53的克隆中（右），几乎没有聚集点的形成 3、突变的p53干扰正常p53的功能 ? 第7章讲到，只有抑癌基因由于两次连续失活突变而被去除，或者一个失活突变与杂合性缺失(LOH)同时发生时，才能出现细胞表型上实质性的变化。然而，小鼠生殖细胞中两个p53基因拷贝的完全缺失对于绝大多数的p53-/-胚胎的发育并无明显影响，p53基因似乎并没有遵循抑癌基因丢失的双击理论。 ? 解决突变