南方医大癌生物学讲义10-1肿瘤细胞无限增殖的两个障碍.docxVIP

第十章（1）肿瘤细胞无限增殖的两个障碍 前言：过了个long long的假期，《癌生物学》终于再次和大家见面了。在家“云学习”的时候有没有想念我们呢~?言归正传，这一章我们的主角是“端粒”。相信每个人对它都有一个基本的概念：就是可以防止衰老哦~?不过，在走近它之前，我们需要先来了解一下肿瘤细胞无限增殖的两个障碍——“复制性衰老”和“危象”。 在正常人体细胞朝着肿瘤性生长状态进化的漫长时间内，它们经历了长期连续的生长分裂周期循环。然而，如此激烈的增殖方式与正常人类细胞的基本特征相冲突：正常人类细胞只被赋予了有限增殖的能力。一旦正常入类细胞耗尽了所允许的细胞倍增次数的配额，这些细胞群体里的细胞将会停止增殖，甚至会进入细胞凋亡。所以，为了形成肿瘤，初期的癌细胞必须突破在正常情况下会限制它们增殖潜能的屏障，获得无限增殖的能力——永生化的细胞表型。 复制性衰老 体外培养的啮齿动物或人类胚胎细胞的连续增殖能力是有限的。这些细胞在衰老之前具体的复制倍增次数取决于制备细胞的物种类型、组织起源及细胞供体的年龄。体外培养的细胞在经过特定的分裂次数后，将会停止生长并进入复制衰老期，简称为衰老期。通常衰老的细胞会继续保持代谢活性，但不可逆地失去了重新进入细胞周期进行复制的能力。这些细胞在单层培养时会伸展开来，具有更大的胞浆，其形态似“煎蛋”状。只要给予充足的营养和生长因子，细胞可存活数周甚至数月?。虽然生长因子可以刺激健康的、未衰老的细胞进行增殖，但并不能使衰老细胞获得增殖能力，只能维持衰老细胞的生存能力。衰老细胞也有生长因子受体，但是其下游的信号通路通过某种未知的机制失活了。 图1：相差显微镜下具有增殖活力的衰老前期细胞 图2：衰老细胞能特异性表达酸性β-半乳糖苷酶（箭头所示蓝色） 虽然大多数细胞在体外复制次数有限，但胚胎干(ES) 细胞在适当条件下，可以分化为人体内所有的已分化的细胞谱系。在体外培养时，如果提供合适的营养，这些细胞会展现无限增殖的潜能，即永生化（这个词有些误导性，因为真正永生化的是ES细胞谱系而不是单个的ES细胞）。 在胚胎形成的最初期，细胞具有无限扩增的能力。但是机体内特定的细胞谱系（如皮肤成纤维细胞、神经元细胞及乳腺上皮细胞）形成后，它们似乎已经被设定了胚后期的倍增次数。肿瘤细胞的增殖能力至少在表面上看起来是与ES细胞相似的。在体外培养多种肿瘤细胞时，只要提供合适的培养条件，它们就能够进行无限增殖。 人体赋予自身细胞谱系有限次数的生长分裂循环是一种肿瘤防御机制。例如，如果细胞要经过100代的增殖才有可能形成临床可检测的肿瘤，那么很多初始阶段的肿瘤细胞在成功形成这样大的肿瘤之前就会耗尽50次或60次增殖的正常配额。 衰老的开启伴随着两个重要的CDK抑制分子p16INK4A和p21Cip1表达的升高。这些CDK抑制分子能够阻止细胞周期的进展，使细胞进入非生长状态。外源性表达p16INK4A, 可使细胞形成与衰老细胞相似甚至一致的细胞生物学状态。p53也许同样能促进衰老的发生：p53的表达水平在小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)衰老时会升高10-40倍。一旦诱导p53高表达，似乎就能通过抑制细胞生长（通过p21Cip1) 来阻止细胞进一步增殖。 异常表达SV40大T抗原（LT）可以使培养的人类细胞避免衰老（常称为“复制性衰老 ) 。LT能够通过结合pRb和p53并使之失活, 使细胞避免进入衰老状态。在大多数人类肿瘤中，由pRb和p53这两个肿瘤抑制蛋白所控制的信号通路经常是失活的。因此，当癌细胞从瘤组织中分离出来进行组织培养时，之前在体内发生的Rb和p53通路的失活可能有助于细胞适应体外培养条件而避免衰老。 图3：大T抗原 (LT) 在抗衰老中的作用 酸性β-半乳糖苷酶（SA-β-gal）是一个广泛应用的衰老标志物，其表达于衰老细胞中。通过这个标志物可以证明细胞衰老不仅仅是体外人工培养的结果，它也会在体内发生。此外，位于人衰老细胞核内的异染色质簇集（SAHF）也是细胞衰老的特异性标志物。 图4：大鼠肾脏组织进行β-半乳糖苷酶 (蓝色）检测 另一个衰老标志物与染色质有关。作为双链DNA断裂反应，断裂处两侧染色质的大片区域携带有经过修饰的组蛋白，称为γ-H2AX，组蛋白被修饰过的染色质能吸引适合的DNA修复蛋白。这些γ-H2AX簇集也出现在衰老细胞中。由X射线引起的γ-H2AX通常会在射线诱导的dsDNA断裂被修复后消失。但衰老细胞中的γ-H2AX则会持续存在，意味着它们代表了累积的不可逆的DNA损伤。 除了体外培养应激，一系列其他细胞生理性应激也能诱导细胞进入与复制性衰老一样的细胞状态。这些生理性应激包括由高氧（即超过正常氧分压导致细胞内的氧化应激）、内源性活性氧物质 (ROS) 、X射线、化疗药物及功能受损端粒所导致的 DNA 损伤，以及