南方医大癌生物学讲义12-2基因组损伤的来源.docxVIP

第十二章（2）基因组损伤的来源 前言：上一期我们了解了预防和修复基因组损伤的机制，这一小节主要来学习基因组损伤的来源，可以进一步加深对基因组损伤修复的理解。 DNA具有双螺旋结构，碱基朝向内部，以遮蔽潜在的化学反应基团，尤其是碱基的氨基侧链，使其免受多种诱变剂的各种化学攻击。一些研究表明，单链DNA中的碱基比双链DNA中的碱基遭受的氧化损伤多100~1000倍。尽管DNA分子具有如此聪明的机制，它还是容易发生化学改变和物理损伤。一些损伤是中性pH条件下低浓度（约10-7mol/L) 氢离子和氢氧根离子的作用造成的。 内源性攻击 脱嘌呤过程 在脱嘌呤过程中，连接嘌呤碱基（腺嘌呤或鸟嘌呤）和脱氧核糖的化学键能够自发断裂。据估计，一个哺乳动物细胞每天通过脱嘌呤作用能丢失多至10000个嘌呤碱基（这相当于人体内每天产生多于1017个化学改变的核苷酸）。 图1：脱嘌呤作用 脱嘧啶过程 与脱嘌呤相比，脱嘧啶作用以低20~100倍的频率发生，但仍能使每个细胞每天丢失多至500个胞嘧啶和胸腺嘧啶。据估计，存在于单一人类基因组中无碱基核苷酸的水平稳定维持在4000~50000个。 脱氨基过程 脱氨基作用可能发生于鸟嘌呤、腺嘌呤和胞嘧啶环中伸出的氨基位点，使氨基丢失，这一脱氨基作用分别产生黄嘌呤、次黄嘌呤和尿嘧啶。尿嘌呤在随后的DNA复制过程中可能被识别为胸腺嘧啶，因此造成C-T点突变，称为转换性突变，即嘧啶之间相互替换。通过脱氨基作用产生的碱基对于正常DNA来说都是外来的，因此能被识别，并被DNA修复酶去除。然而，任何逃避监视和被修复酶去除的碱基都代表了潜在的点突变来源。? 5-甲基胞嘧啶——前面提到的甲基化胞嘧啶——通过自发脱氨基作用能以更高的频率产生胸腺嘧啶。这将会给DNA修复机器带来很严重的问题，因为胸腺嘧啶（与上文提到的脱氨基作用的其他三种产物不同）是正常DNA的组成成分，T:G碱基对可能因此而逃避监视，从而幸存下来，最终作为模板进入下一个DNA复制循环，造成C-T点突变。? 实际上，5-甲基胞嘧啶的脱氨基作用是人类DNA中点突变的主要来源。据估计，内脏器官的肿瘤基因组中63%的点突变（如免受紫外线辐射的组织）发生于CpG序列。在突变的p53等位基因中，约有30%是由野生型p53等位基因中的CpG序列突变而来的。但不是所有CpG位点发生的突变都是由脱氨基作用造成的。 图2：脱氨基作用 氧化过程 细胞内环境对于染色体DNA来说，还具有其他危险。其中最严重的来自氧化过程，这可能比上面提到的反应对DNA产生的损伤更多。最重要的反应发生在线粒体中，在氧气逐渐被还原为水的过程中生成多种中间产物： 图3：氧化过程 一些中间产物，所谓的活性氧物质(ROS),可能会从线粒体中渗出，进入细胞质，从而到达细胞中其他部位。这样的中间产物包括超氧离子、过氧化氢和羟自由基。然而，还会产生多种作为耗氧酶副产物的氧化剂，包括过氧化物酶体（参与多种细胞成分，特别是磷脂氧化反应的细胞质体）中的酶，以及由脂类自发氧化导致过氧化的酶。炎症反应也会为氧化剂提供重要来源，这些氧化剂倾向于引发突变和随之而来的致癌作用。 在这些过程中产生的高反应活性分子，通常在几秒钟之内就能与细胞中很多其他分子形成共价键。DNA中的碱基是众多活性氧物质攻击的位点之一，包括嘌呤碱基和嘧啶碱基。另外，活性氧物质可以诱导单链和双链DNA的断裂，形成无嘌呤和无嘧啶位点（统称为无碱基位点，这些位点中的碱基从脱氧核糖上断裂下来), 以及DNA-蛋白质的交联。许多由此而改变的碱基被修复机器识别，进而从DNA上切除。 两种高频率的氧化反应，一种是脱氧鸟嘌呤核苷(dG)被氧化成8-氧化-脱氧鸟嘌呤核苷(8-oxo-dG); 另一种是脱氧-5-甲基胞嘧啶(d5mC), 这一核苷酸存在于甲基化CpG序列中。后者最初形成一个不稳定的碱基，并很快脱氨基，生成脱氧胸腺嘧啶乙二醇(dTg)。 一些被切下的碱基，包括由脱氧胸腺嘧啶二醇产生的胸腺嘧啶二醇和由8-氧化-脱氧鸟嘌呤核苷(8-oxo-dG)产生的8-脱氧鸟嘌呤，可在哺乳动物尿液中对其进行检测并定量，从而为获得其在整个机体中的合成速率提供 一些信息。 一些实验显示，在多种物种中这些成分的生成量与氧化代谢速率有直接的比例关系。8-oxo-dG的形成会有突变的危险，因为该碱基的一种构象可以很容易与A配对，在DNA复制过程中该碱基错配会导致G:C碱基对替换，即G:A对变成T:A碱基对。这种G→T由嘌呤到嘧啶的替换（或相反）通常称为颠换。 图4：DNA中碱基的氧化 碱基甲基化 其他损伤可以通过碱基与S-腺苷甲硫氨酸反应而引发碱基甲基化。S-腺苷甲硫氨酸是细胞中一种常见的代谢中间物，携带高反应活性的甲基基团。 总的来说，由氧化、脱嘌呤、脱氨基和甲基化产生的持续损伤，每天可能使每个细