南方医大癌生物学讲义14-3上皮间叶转化（下）.docxVIP

第十四章（3）上皮间叶转化（下） 前言：上一节我们已经学习了EMT的两个内容，今天我们接着学习另外的三个内容：“EMT的关键转录因子”，“细胞外蛋白酶”和“小Ras样GTP酶”。 EMT的关键转录因子 像许多复杂的细胞生物学过程一样，EMT也由少量的多效性转录因子(TF)所诱导。通过激活这些转录因子，癌细胞启动了复杂的、多阶段的EMT程序。基质中的异型性信号在癌细胞中诱导这些TF的表达，进而启动EMT程序。 目前至少发现了6个EMT-TF, 在特定的上皮细胞中异位表达这些转录因子中的任何一个，都能诱发EMT现象。例如，在脊椎动物的早期胚胎中，Snail首先在一部分外胚层细胞表达，这部分细胞随这原肠胚的形成后来逐渐发育成中胚叶。Snail、Slug和Twist在胚胎发育过程中的表达都可以使上皮细胞转变成可迁移的间质细胞并形成中胚叶。Snail及其同一家族的Slug还参与一些其他的胚胎发育步骤，这些步骤都涉及一种组织向另外一种组织的转变。这些转录因子的真正起源如表1所示。 某些这类转录因子也在成人组织、如创伤愈合的组织重塑阶段表达。培养的单层上皮细胞的体外划痕实验能很好地模拟这一现象。Slug在划痕边缘存活的上皮细胞中诱导表达，以使细胞获得运动能力并迁移到划痕处。 Snail和Slug(也称为SNAl1和SNAI2)是C2H2型锌指转录因子家族成员。现有研究结果表明，Snail-Slug主要充当转录抑制因子，如这两个因子都可以抑制E-钙黏蛋白基因的表达。 胚胎期中Snail及其相关的转录因子Slug和Goosecoid可以被某些基质信号，如TGF-β和Wnts诱导表达。Twist 表达水平同样受TGF-β信号诱导。 表1：参与EMT现象的转录因子 在癌细胞中EMT-TF总是结合在一起表达，提示它们之中没有一个能单独组织起EMT程序相关的、所有细胞生物学改变。实际上，人们发现这些主要调节因子可诱导其他因子的产生，这通常是由一个EMT-TF直接结合到另一个EMT-TF启动子上实现的。例如，Twist可直接结合至Twist、Snail、Slug和Zeb1的启动子上，而为了激活EMT程序，它实际上有赖于Slug的诱导表达。此外，在人类乳腺癌中Slug常常与Twist共表达；在某些乳腺癌细胞中当Twist不再表达时，Slug表达也随之缺失。同样，某些这类转录因子以冗余的方式发挥作用，如Snail、Slug、ZEB1和ZEB2都可以结合在E-钙黏蛋白基因(CDH1)启动子上，并抑制E-钙黏蛋白的表达。与此一致，Twist也可以通过Slug抑制E-钙黏蛋白的表达。 在这些EMT-TF中，ZEB1和ZEB2似乎在决定癌细胞是保留上皮细胞状态还是激活EMT程序的过程中发挥决定性仵用。它们发挥这一功能有一部分是通过形成一个双稳态开关，使细胞在很长一段时间内保持在间叶细胞或上皮细胞状态。对 ZEB1和ZEB2 mRNA的测序结果表明，miR-200家族成员靶向其3UTR(3非翻译区）的多个位点，致使翻译抑制和（或）这些mRNA降解。 下图揭示了一个作为双稳态开关的互相拮抗机制，可使一个细胞相对稳定地处于间叶细胞或上皮细胞状态。一旦一组调节因子占上风（如ZEB1/2或miR-200), 细胞将进入一个方向并关闭另一方向，且长期维持于间叶或上皮细胞状态。原则上，每组调节因子可作用于其他基因和mRNA。例如，ZEB1/2可抑制E-钙黏蛋白和其他上皮细胞基因的表达。不过miR-200的功能似乎仅局限于抑制ZEB1/2的表达上。 图1：双稳态开关 EMT诱导转录因子对细胞性状的影响提示，这些重要的调节因子可以协同性地调节侵袭-转移级联反应中几乎所有的步骤。然而还有一个重要的转移步骤尚未考虑：播散的癌细胞若要形成转移灶，必须先具有肿瘤干细胞(CSC）所具有的肿瘤起始能力。 一群实验永生化的MEC通过外源表达EMT诱导转录因子Twist或Snail,进入EMT程序。对照组和两个实验组的MEC细胞通过荧光激活细胞分选技术(FACS)分为CD44hiCD24lo和CD44loCD24hi两个细胞亚群。在培养的对照组细胞中，只有很小一部分细胞具有干细胞特征，而外源表达Twist或Snail则使原先为非干细胞的这部分细胞群转变为CD44hiCD24lo细胞群，这部分细胞亚群中包含了所有的干细胞。 另外一个实验显示了更有说服力的证据：利用FACS将永生化的人MEC区分为两个细胞亚群，一个亚群包含干细胞(CD44hiCD24lo), 另一个亚群包含极少干细胞(CD44loCD24hi) 。当定量分析这两个细胞亚群的mRNA水平时发现，与非干细胞亚群相比，干细胞富集亚群中间叶标志表达水平显著提高，同时一组EMT-TF的mRNA表达水平也明显增加。这里EMT诱导转录因子与干细胞宫集