南方医大癌生物学讲义10-2端粒和端粒酶.docxVIP

第十章（2）端粒和端粒酶 前言：上一期我们已经介绍了肿瘤细胞无限增殖面临的两个障碍。今天我们主要是学习“端粒”和“端粒酶”的相关内容。相信通过本期的学习，我们对端粒和端粒酶的理解会更上一层楼~ 端粒的结构 在哺乳动物细胞（以及许多其他后生动物细胞）中，端粒由重复的六核苷酸序列组成，其中一条链(富含G)上为5-TTAGGG-3, 互补链上(富含C)为 5-CCCTAA-3。在正常人体细胞中，端粒DNA由数千个重复的六核苷酸序列组成，在染色体末端形成5-10kb 长的序列重复片段。 端粒DNA通常为5-10kb长。在功能性端粒DNA(中间)与非端粒染色体DNA(最左侧）之间还存在着亚端粒DNA区域。亚端粒DNA区域里含有TTAGGG类似片段，但并没有染色体末端保护功能。然而，由于亚端粒DNA含有端粒类似序列，它通常也是端粒限制性片段(TRF)的组成部分。但是只有单纯的端粒重复片段能够保护染色体DNA末端：当单纯串联重复片段的重复次数减少到12次以下时就会丧失末端保护功能。因此，即使仍然有数kb长度的TRF存在，但端粒已经丧失了阻止染色体DNA末端融合的能力。 图1：端粒DNA的结构 特殊的是，富G链多出一百至数百个核苷酸，导致该链3单链端外悬。这种凸出的链会形成一种最不寻常的分子构型——t环。当时通过电子显微镜分析端粒DNA时发现了一种环形结构，实质上是套索结构。这种构型的形成依赖于三链DNA复合体的形成 。有可能所有端粒DNA的末端均含有 t 环，但是由于在电子显微镜下保存和观察此结构的技术上的限制，只有一部分端粒在电子显微镜下可以观察到 t 环。t 环有助于保护线性DNA分子未端，因为单链末端的外悬区被巧妙地塞进双链区域，以保护其免受损伤。 下图为 t 环的示意图，显示了 3端凸出的富G链(粉色)与富C链(蓝色)的小段区域退火形成詈换(D环)(粉色链)。图中箭头方向为 5→3。 图2：t 环结构 下图再次显示了t环，3端伸入染色体形成双链螺旋，在图中用粗线标明(粉色)。 图3：t 环结构 相对较长的双链端粒DNA和相对较短的外悬单链末端都与特定蛋白质相结合。这些蛋白质中含有能够特异识别并结合该六核苷酸序列的结构域，能够与端粒DNA的双链和单链区结合。端粒结合蛋白、尚未被发现的相关蛋白及端粒DNA一起构成的核蛋白复合体就称为端粒。构成端粒复合物的一些端粒相关蛋白能保护端粒免于降解。其中，TRF1和TRF2能够结合端粒的双链DNA部分，而第三个蛋白POT1既能结合富G链的 3端外悬单链，又能与置换环(D环)的单链DNA结合。 图4：端粒复合物 每个端粒中会出现多个端粒复合物，它们负责t环的结构维持。如下图所示，POT1通过和D环结合能够维持其结构稳定性并维持 t 环结构完整性。 图5：端粒复合物 在细胞周期的S期，复制机制能高效地复制线性DNA分子中间的序列，即染色体的主体部分，但复制染色体末端序列是极其困难的。困难之处在于所有DNA链的合成必须从已有DNA的3羟基端开始，DNA3羟基端以与引物相似的方式来延伸核DNA链。如果没有可用的DNA引物，则以RNA分子的3端作为DNA合成的引物。 如果引物酶（其作用是安置RNA引物）恰巧在距模板链 ( 滞后链合成”发生处）3端的一定距离处放置了一个RNA引物，那么DNA聚合酶新合成的DNA链的 3端将缺少一定数量与模板链互补的碱基。即使引物酶恰巧位于模板链的末端，并合成了一条RNA引物，在新合成的子链中仍缺失大约10个核苷酸，这正相当于RNA引物的长度，因为RNA在引物完成起始DNA延伸的使命后就被降解了。最后的结果是DNA两条模板链的其中一条末端的核苷酸序列不能被适当复制。 在正常DNA复制过程中，亲本的双螺旋DNA在解旋酶作用下解开，使得复制过程持续进行。新合成的滞后链由短的RNA引物片段引导，引物酶按数百个核苷酸的间隔依次安置这些RNA引物。RNA 分子的3羟基端作为新合成子链的起始。在这些 RNA 引物尚未移去、片段尚未融合之前，这些片段称为冈崎片段。因为合成按5→3方向进行，所以滞后链的合成与延伸的方向和复制叉前进的方向相反。而另一个亲本链的复制由于延伸方向和复制叉的移动方向一致，能够连续进行复制，随着亲本链的解旋向3端延伸。下图中每条链5→3的方向由箭头指示。粗线代表亲本DNA链，细线代表新合成链。 图6：正常DNA复制 由于以上原因，前导链DNA的合成将会一直进行到端粒的末端，产生和原来端粒DNA序列一致的拷贝。然而，滞后链的合成需要用到端粒末端DNA (环状）附近对应的RNA引物。由于此RNA引物随后会被移除，而且它也未必确定位于蓝色模板链的末端精确互补，因此最终合成的DNA链是缺少一段亲本链的互补序列的，最后造成部分亲本链DNA(粗线，蓝色）没有被复制，以及子代细胞基因