南方医大癌生物学讲义09-4凋亡与肿瘤.docxVIP

第九章（4） 凋亡与肿瘤 “我们已经知道，作为抑癌基因，P53影响肿瘤发生发展的机制包括在DNA损伤后阻止细胞周期的进程并参与修复，在机体面对不利因素的情况下介导细胞凋亡。然而，直到现在为止，我们对凋亡的认识并不完全，也未能完全公平评判自杀程序在肿瘤病因学中的作用。现在，我们重新回顾一下凋亡，并展开更深层次的探讨。” 1、凋亡过程依赖线粒体 1972年之前，多细胞动物组织里的细胞通常被认为是因坏死而被单个消灭的；20世纪80年代晚期，对线虫发育的遗传学研究拟示了凋亡在这些微小动物的正常发育过程中参与清除各种细胞。大家逐渐认识到，对于所有的多细胞生物而言，凋亡都是一个基本的生物学行为。 表9-4-1：凋亡与坏死的区别 线粒体在凋亡过程中发挥着重要的作用，细胞色素c是这个过程的核心因素，通常位于线粒体内膜和外膜之间的间隙，作为氧化磷酸化作用的一部分，起传递电子的作用。然而，一旦某些信号起始凋亡，线粒体的外膜开启通道，细胞色素c就会脱离线粒体，进入外围胞质，联合其他的蛋白质引起导致凋亡的级联事件。所以，在真核细胞进化的过程中，在细胞产生大量能量的地方同时还存在养另一完全不相关的功能，那就是产生和释放生化信号，诱导相关变化最终导致细胞死亡。 图9-4-1：细胞色素c从线粒体中释放入细胞质：（A)?起始时，细胞色素c与线粒体在细胞质中的分布一致；(B)(C)(D)当凋亡逐渐进展，细胞色素c逐渐从线粒体中释放进入细胞质中，它在细胞浆中的染色体变得越来越均匀一致，同时细胞核表示出与凋亡相一致的断裂细胞色素c可被特异性荧光标记抗体检测（绿色），与染料标记细胞核（红橙色）区别 Bcl-2蛋白是一个大而复杂的家族中的一员，它能调控细胞色素c通过线粒体外膜上的特异性通道释放进入细胞质，这些通道也特异性地决定细胞色素c和其他的蛋白质是否从线粒体释放入细胞质。Bcl-2家族的一些成员，如Bcl-2和bcl-XL，能够保持这些通道关闭；而其他Bcl-2相关蛋白，如Bax、Bad、Bak和Bid，起开启这些通道的作用。 图9-4-2：Bcl-2和相关蛋白：Bcl家族成员既有抑制凋亡的作用又有促进凋亡的作用。这些蛋白质都具有一个同样的BH3结构域（紫色），有些如Bcl-2还具有BH1和BH2结构域?（红色，蓝绿色），一些成员还具有用于铀定于细胞膜上的跨膜结构域（浅绿色）和BH4结构域（深绿色），具有BH4结构域的蛋白质可以在一定程度上抑制内质网钙离子释放，进而具有抑制凋亡的功能。促凋亡蛋白可以分为Bax家族和只含有BH3结构域家族蛋白。Bax家族蛋白以无活性形式，存在于线粒体外膜或者细胞质基质中，无活性的只含BH3结构域的蛋白质只存在于细胞质基质中，两类促亡蛋白在凋亡信号的刺激下被活化（或者），转位到线粒体外膜。 人类基因组已知能编码24种Bcl-2相关蛋白。它们中的6种是抗凋亡蛋白，剩下的18种是促凋亡蛋白。每一个通道内的促凋亡蛋白和抗凋亡蛋白的相对水平决定细胞色素c是保留在线粒体内还是释放出来，从这个角度来说，线粒体膜通道决定细胞的生存或死亡。这也可以解释为，组织中不同细胞的命运由促凋亡和抗凋亡?Bcl-2样蛋白之间的精密平衡来掌控。 图9-4-3：凋亡前体蛋白和抗凋亡蛋白之间的精密平衡：(A)?野生型小鼠的肾脏在5周龄时结构完整；(B)?抗凋亡bcl-2基因的双生殖系拷贝缺失（造成bcl-2-/-表型）导致这个年龄小鼠广泛性的细胞凋亡和多囊性肾病；(C)如果凋亡前体bim基因的单生殖系拷贝缺失可避免这种情况的出现（高产bcl-2-/-bim+/-表型） Bcl-2蛋白家族的促凋亡蛋白和抗凋亡蛋白的作用各不相同，每个成员都有自己的反向作用伴随者。 图9-4-4：Bcl-2蛋白家族的每一个成员都有自己的一套反向作用剂 此外，这些蛋白质都可以诱导特定细胞类型中的细胞凋亡。例如，Bim在控制乳腺的发展中起到了关键性的作用，使管腔形成了管道。细胞色素c一旦从线粒体逃逸至细胞质，它就与Apaf-1蛋白形成一个复合物结构，称为凋亡小体。形成的这个凋亡小体复合物活化潜在的细胞质蛋白酶前体caspase9（半胱天冬酶9），使之变成活化的caspase9。小体活化的caspase9剪切前体caspase3活化另一相关的蛋白酶，接着再切割并活化其他前体caspase,?形成条链式反应。这种剪切的顺序相连形成一种信号级联放大。当胞质的细胞色素c活化caspase时，另一个与细胞色素c一同从线粒体释放出来的蛋白质Smac/DIA-BLO可以失活一组称为IAP（inhibitor of apoptosis）的抗凋亡蛋白。正常情况下，lAP以下面两种方式抑制caspase?的活性：直接结合和标记在泛素化caspase上并把它降解。如果没有IAP持续抑制的影响，caspase可以自