南方医大癌生物学讲义08-2 pRb在细胞周期时钟中的作用.docxVIP

第八章（2）pRb在细胞周期时钟中的作用 前言：在第七章的学习中，我们已经知道Rb是一个肿瘤抑制基因，该基因编码一个约105kDa的磷酸化核蛋白，这个蛋白被称为pRb或RB, 在多种肿瘤细胞中都发现该蛋白质的缺失或结构缺陷。在肿瘤细胞中?pRb?功能受损的两条途径：在视网膜母细胞瘤、骨肉瘤和小细胞肺癌中?Rb?基因的突变会使?pRb?丧失功能；在感染并转化了人乳头瘤病毒?(HPV)?的细胞中也会出现同样的现象。在这一小节，我们就要来揭秘?pRb?在细胞周期进程中的作用。 No.1 pRb在细胞周期中的变化 已有的实验结果显示，pRb的磷酸化与细胞周期的进程相一致。在G0期，pRb基本是非磷酸化状态；进入G1期后，pRb上少量的丝氨酸/苏氨酸残基开始磷酸化（低磷酸化）；细胞通过R点后，pRb 上大量的丝氨酸/苏氨酸残基被磷酸化（高度磷酸化）。一旦细胞通过R点，pRb在随后的整个细胞周期中就会持续维持磷酸化状态；在细胞完 成有丝分裂后，pRb 上的磷酸化基团被 I 型蛋白磷酸酯酶 (PPl) 水解去除。这些磷酸基团的水解是下一个细胞周期的必需阶段，由此，pRb开始进入下一个磷酸化循环。pRb的高度磷酸化与细胞通过R点的时间相一致，提示这个蛋白质可能是R点转换的分子调节器。 在G1早期和中期的pRb是低磷酸化状态的，它对细胞的生长起抑制作用；而在R点之后，pRb是高度磷酸化状态，它丧失了生长抑制功能，即蛋白质的磷酸化使其功能失活。这意味着R点转换伴随着pRb的生化改变而完成。 pRb的磷酸化是可逆的过程。如果细胞在S期或G2期受到生理性应激，磷酸化的pRb可以被目前尚未知的磷酸酶水解，使pRb回到抑制生长的状态。这些应激包括缺氧、DNA 损伤、有丝分裂纺锤体被破坏等。一旦细胞生理应激或损伤被解除，这种反应也将被逆转。 图1：pRb的细胞周期依赖性磷酸化 1988 年的研究揭示了一个关于DNA肿瘤病毒编码蛋白，干扰细胞生长的重要调控机制。人类 5 型腺病毒中E1A癌基因编码蛋白的生化特征表明，在腺病毒感染的细胞中，这种癌蛋白能够紧密结合许多细胞蛋白，其中就包括pRb。随后，在人宫颈癌中发现病毒SV40编码的大T癌蛋白和某些人类HPV病毒编码的E7癌蛋白也能与pRb物理性结合，形成复合物。 除了pRb，能够与这些DNA肿瘤病毒编码蛋白结合的还有pRb的两个同源蛋白——p107和p130。pRb和它的两个同源蛋白常常被称为 “口袋蛋白“, 每个蛋白质携带一个可被病毒癌基因如 E1A 插入的沟槽。E1A 蛋白可以结合这 3 种细胞蛋白，并且明显是为了将这三种蛋白捕获隔离。一个病毒感染细胞后需要重置被感染细胞的调控通路，来创建一个支持病毒复制各个步骤的细胞内环境。病毒DNA复制是最重要的环节。显然，病毒只有把这些控制细胞处于静息期的调控蛋白功能失活，使受感染的细胞从G0静息静释放进入活跃的细胞周期，DNA才能有效复制。此外，HPV E7 蛋白不仅能直接阻断pRb功能，还能介导pRb的泛素化从而促进其降解。 实验还发现，DNA肿瘤病毒编码蛋白能够优先结合低磷酸化的pRb, 而这种低磷酸化的pRb主要出现在G1期。相反，这些病毒编码癌蛋白不能结合G1晚期及随后的细胞周期中出现的高度磷酸化pRb。这一发现也提示，肿瘤病毒编码蛋白的主要作用于特定状态下的pRb存在于G1早期和中期的、起生长抑制作用的pRb, 而对那些已经被其他途径失活的pRb蛋白则不起作用。 No.2 pRb磷酸化状态的调控 pRb就像细胞周期时钟的守护者一样，使这条通道保持关闭状态，直到pRb被高度磷酸化而失去生长抑制功能，这扇大门才打开，才能允许细胞进入G1晚期及后续的细胞周期时相。 既然pRb是监控细胞生长与否的关键分子，那么它的磷酸化必须被严格调控。在G1早期和中期，cyclinD?与其配体CDK4/6参与pRb的起始磷酸化，并产生低磷酸化的pRb蛋白。而且cyclinD的表达水平在很大程度上受到细胞外信号尤其是促有丝分裂生长因子的调控，故而我们能归纳出这样一条信号通路：生长因子诱导cyclinD的表达；细胞周期蛋白D与CDK4/6相互结合，开始pRb的磷酸化过程。 在正常的细胞周期中，pRb的起始磷酸化对于其在R点的功能失活是必需的，但是条件并不充分，因为R点转换需要pRb的高度磷酸化。实际上，cyclinE的表达水平在R点显著升高，其与配体CDK2相互作用能促进pRb磷酸化的完成，使pRb进入高度磷酸化状态而功能失活。这意味着不经过cyclinD-CDK4/6的起始磷酸化的pRb将不能成为cyclinE-CDK2复合体的磷酸化底物。pRb的同源蛋白p107和p130的磷酸化和功能失活也在cyclinD-CDK4/6的调控之下，其中或许还包括 cyclinE-CDK2复合体