DB15T 2544-2022大球盖菇菌种制作技术规程.docxVIP

ICS65.020.01CCS ICS 65.020.01 CCS B05 内 蒙 古 自 治 区 地 方 标 准 DB15/T 2544—2022 大球盖菇菌种制作技术规程 Regulation of strain manufacture for stropharia rugosoannulata 2022-04-25 2022-04-25 发布 2022-05-25 实施 内蒙古自治区市场监督管理局 发 布 前 言 本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。 本文件由内蒙古自治区果蔬标准化技术委员会（SAM/TC 25）归口。本文件起草单位：内蒙古自治区农牧业科学院。 本文件主要起草人：王海燕、孙国琴、李亚娇、庞杰、于传宗、王永、韩凤英、扈顺、薛国萍、慕宗杰、付崇毅、康立茹。 大球盖菇菌种制作技术规程 范围 本文件规定了大球盖菇菌种生产要求、母种生产、原种和栽培种生产、检验、入库等技术流程要点。本文件适用于大球盖菇母种、原种、栽培种菌种制作要求。 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB 4806.7 食品安全国家标准食品接触用塑料材料及制品 NY/T 528 食用菌菌种生产技术规程 NY/T 1731 食用菌菌种良好作业规范 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 下列术语和定义适用于本文件。 菌种 spawn 通过生产试验验证具有特异性、均一性和稳定性，丰产性好、抗性强的大球盖菇菌株或品种，培养生长在适宜基质上具结实性的菌丝培养物，包括母种、原种和栽培种。 母种 stock culture 经各种方法选育得到的具有结实性的菌丝体纯培养物及其继代培养物，以玻璃试管或培养皿为培养容器和使用单位，也称为一级种、试管种。 原种 pre-culture spawn 由母种移植、扩大培养而成的菌丝体纯培养物。常以菌种瓶（玻璃菌种瓶或塑料菌种瓶）或（12～ 17）cm×（22～28）cm×（0.04～0.05）mm聚丙烯塑料袋为容器。也称为二级种。 栽培种 spawn 由原种移植、扩大培养而成的菌丝体纯培养物。常以菌种瓶（玻璃瓶或塑料瓶）或（15～17）cm× （33～35）cm×（0.04～0.05） mm聚丙烯塑料袋为容器。栽培种只能用于扩大到栽培出菇袋或直接出菇，不可以再次扩大繁殖菌种。也称为三级种。 菌种生产要求 人员 生产所需要的技术人员和检验人员应经过专业培训、掌握基础知识及菌种生产技术规程要求的相应专业技术人员。 场地、厂房 菌种生产应选择地势高，通风良好，空气清新，水源近，排水通畅，交通便利的场所。场地环境条件符合NY/T 528规定。 菌种生产厂房要求有各自隔离的摊晒场、原材料库、配料分装库。配套有配料室、搅拌室、装袋（瓶） 室、灭菌室、冷却室、接种室、培养室（通风好，有纱窗）、菌种检测室及菌种冷藏库等各环节的设施。冷却室、接种室，培养室都要有离子净化设施。菌种生产厂房条件应符合NY/T 1731规定。 生产设备 种生产设备应符合NY/T 1731规定。5 母种生产 种生产设备应符合NY/T 1731规定。 5 母种生产 培养基 马铃薯200 g、葡萄糖20 g、蛋白胨1.5 g、琼脂18 g、加水至1000 mL。 容器 试管规格18 mm×180 mm或者20 mm×200 mm；培养皿直径7 cm～9 cm；三角瓶规格300 mL～500 mL。 分装和灭菌 斜面培养基分装和灭菌 分装培养基至试管1/4处，用棉塞或硅胶塞封闭试管口，每5支试管为1把，牛皮纸包棉塞，橡皮筋扎紧，棉塞向上放置。棉塞应采用梳棉，不能使用脱脂棉。在121 ℃～122 ℃（0.11 MPa～0.12 MPa） 下灭菌25 min。 灭菌后温度降到（65±5）℃时，在空气清洁的室内摆斜面，要求斜面长度不超过试管长度的2/3。从摆好的试管中抽取3 %～5 %的试管，在28 ℃下培养48 h，无微生物长出为灭菌合格。 平板培养基分装和灭菌 培养基装入300 mL～500 mL三角瓶至刻度的2/3处，用带滤膜的封口膜封口后放入灭菌锅；玻璃培养皿用报纸包好，放入灭菌锅。在温度升至102 ℃～105 ℃排净冷空气后升压，升至121 ℃～122 ℃ （0.11 MPa～0.12 MPa）恒温灭菌25 min。 灭菌后温度降到（65±5）℃时，在超净工作台内将三角瓶中的培养基分装至无菌培养皿中，培养基占培养皿高度的1/3～1/2。 接种 超净工作台或接种箱紫外灯照射30 min后吹