分子生物学常用试剂配制.docVIP

分子生物学常用试剂配制(精) 分子生物学常用试剂配制(精) 分子生物学常用试剂配制(精) 分子生物学常用试剂的配制 1.LB(Luria-Bertani培育液、平板的配制 配制每升LB培育液,应在950ml去离子水中加入: 细菌培育用酵母提取物(bacto-yeastextract5g 细菌培育用胰化蛋白胨(bacto-tryptone10g NaCl10g 摇动容器直至溶质完满溶解,用5mol/LNaOH(约0.2ml调理pH值至7.0,加入去 离子水至整体积为1L,在151bf/in2(1.034105Pa×高压下蒸汽灭菌20min。 LB琼脂平板的配制: 先按上述配方配制液体培育基,临高压灭菌前加入琼脂糖15g/L,同法高压蒸汽灭菌20min。从高压灭菌器拿出培育基时应轻轻旋动以使溶化的琼脂糖能平均分 布于整个培育基溶液中,应使培育基降温至50℃时,加入抗生素等不耐热的物质。为防范产生气泡,混匀培育基时应采纳旋动的方式,此后可直接从烧瓶中倾出培育基铺制平板。90mm直径的培育皿约需30-50ml培育基,培育基完满凝结后,应倒置平皿并储蓄于4℃备用。 2.琼脂糖凝胶的配制 依据所需凝胶的浓度秤取琼脂糖,加入相应电泳缓冲液中,用微波炉加热煮沸至琼脂糖完满溶解,加入合适EB混匀,合适冷却后倾入凝胶铸槽中,插入梳子,凝胶厚度不超出梳孔,若有气泡产生则用玻璃棒驱除,不可以过早拔掉梳子,应待凝胶完满凝结 后才能拔掉梳子。3.P1、P2、P3的配制P1的配制:在800ml去离子水中溶入Tris碱6.06g,Na2EDTA2H2O·3.72g,用HCl调整pH至8.0,用去离子水调整容积 至1升,每升P1内加入RNaseA100mg。P2的配制:在950ml去离子水中溶入 NaOH8.0g,20%SDS50ml,调整容积至1升。P3的配制:在500ml去离子水中溶入 醋酸钾294.5g,用冰醋酸调整pH值至5.5,用去离子水调整容积至1升。 4.常用缓冲液: TE pH7.4 10mmol/LTrisCl·(pH7.4 1mmol/LEDTA(pH8.0 pH7.6 10mmol/LTrisCl·(pH7.6 1mmol/LEDTA(pH8.0 pH8.0 10mmol/LTrisCl·(pH8.0 1mmol/LEDTA(pH8.0 STE(亦称TEN 0.1mmol/LNaCl 10mmol/LTrisCl·(pH8.0 1mmol/LEDTA(pH8.0 STE液(另一种配方 Tris-HCI10mMPH8.0 NaCl10mM EDTA10mMPH8.0 STET 0.1mmol/LNaCl 10mmol/LTrisCl·(pH8.0 1mmol/LEDTA(pH8.0 5%TritonX-100 TNT 10mmol/LTrisCl·(pH8.0 150mmol/LNaCl 0.05%Tween20 电泳缓冲液 Tris-乙酸(TAE:50×浓储蓄液(每升:242gTris碱 57.1ml冰乙酸 100ml0.5mmol/LEDTA(pH8.0 使用时再稀释50倍。 Tris-磷酸(TPE:10×浓储蓄液(每升:108gTris碱 15.5ml85%磷酸(1.679g/ml 40ml0.5mmol/LEDTA(pH8.0 使用时再稀释10倍。 Tris-硼酸(TBE:5×浓储蓄液(每升:54gTris碱 27.5g硼酸20ml0.5mmol/LEDTA(pH8.0 使用时再稀释10倍。 碱性缓冲液:1×使用液(每升:5ml10mol/LNaOH 2ml0.5mmol/LEDTA(pH8.0 Tris-甘氨酸:5×浓储蓄液(每升:15.1gTris碱 94g甘氨酸(电泳级(pH8.3 50ml10%SDS(电泳级 2×SDS凝胶加样缓冲液 100mmol/LTrisHCl(pH6·.8 200mmol/L二硫苏糖醇(DTT 4%SDS(电泳级 0.2%溴酚蓝 20%甘油 30%丙烯酰胺: 将29g丙烯酰胺和  1gN,N  ’-亚甲双丙烯酰胺溶于整体积为  60ml的水中,加热 至37℃溶解之,补加 水至终体积为100ml。用Nalgene滤器(0.45孔径过滤除菌查证该溶液的pH值应不大于7.0,置棕色瓶中 保留于室温。 10mol/L乙酸铵: 把770g乙酸铵溶解于800ml水中,加水定容至1L后过滤除菌。 1mol/LCaCl2: 在200ml纯水中(Milli-Q水或相当级其余水溶解54gCaCl2·6H2O,用0.22滤器 过滤除菌,分装成10ml小份储蓄于-20℃。 2.5mol/LCaCl2: 在20ml蒸馏水中溶解13.5gCaCl26H2O·,用0.22滤器过滤除菌,分装成1ml小 份储蓄于 -20℃。