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* 第二十三页,共五十二页,2022年,8月28日 * 第二十四页,共五十二页,2022年,8月28日 * 第二十五页,共五十二页,2022年,8月28日 * (5)DNA的超螺旋密度(λ) λ=(L-L0)/L0 L0是指松驰环形DNA的L值,天然DNA的超螺旋密度一般为-0.03~-0.09,平均每100个螺旋出现3-9个负超螺旋。 a. 天然的DNA都呈负超螺旋,但体外可得到正超螺旋;由于双链DNA是动态变化的,其负超螺旋的链环数也会有所波动。 b. 负超螺旋会部分地转变为单链泡状结构,这种单链泡状结构也是解除松缠作用造成的胁变的一种途径;当然蛋白质会与这些单链泡状结构结合参与复制活转录;这也许就是为什么在生物内DNA总是采取负超螺旋形式的主要原因。 c. 溴化乙锭(ethidium bromide)能与DNA紧密结合,使DNA的密度降低;它插入DNA分子碱基对之间,引起DNA分子松旋,随着EB量的增加,负超螺旋DNA就转变为松弛态;EB的进一步增加,DNA就转变为正超螺旋。 第二十六页,共五十二页,2022年,8月28日 * 第二十七页,共五十二页,2022年,8月28日 * (6)不同类型DNA的高级结构及性质 a. 超螺旋使环状DNA分子变得更致密,在超速离心和在凝胶电泳中的迁移速度都增加;琼脂糖凝胶电泳可将超螺旋仅差一圈的DNA分离开。 b. 真核生物中,DNA与组蛋白八聚体形成核小体结构时,存在着负超螺旋。 c. DNA超螺旋是由DNA拓扑异构酶产生的。 d. 坍缩DNA:当闭合环超螺旋变成闭合环松弛形DNA时,经碱变性或热变性使其氢键断裂,但两条链无法分离,结果生成两条链紧密缠结的分子;坍缩DNA具有很高的沉降常数,相对沉降常数约3.0(单链环状DNA的相对沉降常数大约为1.14;线性单链DNA的相对沉降常数为1.30)。 e. 环连DNA :在DNA复制过程中的产物或由拓扑异构酶催化生成,由两个以上环形DNA分子环连而成。 f. 闭合环超螺旋DNA对于温度和碱性有较强的抵抗力,不容易发生变性;这样,可以寻找一个临界条件,使闭合环松弛形和开环松弛形DNA发生变性;而闭合环超螺旋不变性或很少变性。很多分离或鉴定闭合环超螺旋形DNA的方法都是依据其特性而设计的。 第二十八页,共五十二页,2022年,8月28日 * 第二十九页,共五十二页,2022年,8月28日 * 第三十页,共五十二页,2022年,8月28日 * (7)超螺旋的意义 a. 超螺旋的形成是DNA分子复制和转录的需要: 生物体内DNA结构是处于动态之中,超螺旋的引入就提高了DNA的能量水平,而超螺旋程度的改变介导了DNA结构的变化,即超螺旋多余的能量可能使DNA双股链分开,或局部熔解,这种结构上的变化对DNA分子复制和转录等的启动很重要。 b. 超螺旋可使DNA分子形成高度致密的状态从而得以容纳于有限的空间。 如E.coli的DNA的总长度是其细胞长度的100倍, 由于它的DNA存在着超螺旋才能包装成类核(nucleoid)。 c. 染色体的形成过程:一级结构(核小体,直径10nm)、二级结构(螺线体,直径30nm)、三级结构(超螺线体,直径400nm)、四级结构(染色体,直径1000nm),DNA双螺旋进一步扭曲盘旋所形成的特定空间结构。 第三十一页,共五十二页,2022年,8月28日 * 第三十二页,共五十二页,2022年,8月28日 * 第三十三页,共五十二页,2022年,8月28日 * 第二节、RNA的组成与结构 一、 RNA的组成 RNA所含的戊糖为D-核糖,碱基为A、C、G、U。 二、RNA的基本结构 1.RNA的一级结构:指RNA分子中4种核苷酸的连接方式和排列顺序。 2. RNA的分类及其二级结构 (1)mRNA:帽子结构和尾巴,5’端,7’-甲基鸟苷;3’端, polyA 尾巴。 (2)rRNA:单链RNA自行盘绕形成局部双螺旋的多“茎”多“环”结构,螺旋部分称为“茎”或“臂”非螺旋部分称为“环”,在螺旋区,A与U配对,G与C配对。5SrRNA和16S rRNA分别构成大亚基和小亚基。 (3)tRNA的二级结构: 三叶草形状可分为:氨基酸接受区、反密码区、二氢尿嘧啶区、TΨC区和可变区。除氨基酸接受区外,其余每个区都含有一个突环和一个臂。 第三十四页,共五十二页,2022年,8月28日 * 3.tRNA的三级结构:倒“L”形,所有的tRNA折叠后形成大小相似及三维构象相似的三级结
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