病原生物学与免疫学实验.pptVIP

固定的目的： 使细菌的细胞凝固，使菌体与玻片粘得更牢固； 可改变菌体对染料的通透性； 加热固定可杀死细菌，比较安全。 第三十页，共四十九页。 多种标本涂片标记示意图 如多种标本，可用蜡笔在玻片上划为数格，并于玻片的背面，标明标本的编号。 正面 反面 第三十一页，共四十九页。 ㈡革兰氏染色法（Gram Stain）  初染：滴加结晶紫染液于涂片上，染1分钟，水洗，甩干。 媒染：加卢戈氏碘液，1分钟后水洗，甩干。 脱色：加95％酒精数滴于涂片上，频频摇3～5秒后，斜持玻片，使酒精流去，再加酒精。如此重复2～3次，直至流下的酒精无色或稍呈淡紫色时为止（约30秒钟）。水洗，甩干。 复染：以稀释石炭酸复红染液复染1分钟后，水洗，待干或用吸水纸印干，油镜镜检。 第三十二页，共四十九页。 【操作步骤】 结晶紫初染 碘液媒染 乙醇脱色 复红复染 涂片固定 由丹麦医生Hans Christian Gram于1884年创立。 革兰氏染色法 第三十三页，共四十九页。 【结果】 细菌被染成紫色者，称为革兰氏阳性菌； 而细菌染成红色者，称为革兰氏阴性菌； 阳性菌——紫色 阴性菌——红色 第三十四页，共四十九页。 【意义】 鉴别细菌，用本法染色可将细菌分成两大类。 了解致病性 指导选择用药 第三十五页，共四十九页。 【革兰氏染色法的原理 】 有三种学说。 1.等电点学说：革兰氏阳性细菌的等电点（pH 2～3）比阴性菌（pH4～5）为低，—般染色时溶液的酸碱度约在pH 7左右，电离后阳性菌带有的阴电荷比阴性菌多。因此，摄取的碱性染料亦较多，不易脱色。 第三十六页，共四十九页。 2.通透性学说： 革兰氏阳性菌细胞膜的通透性比阴性菌低，进入细胞的染料和碘液结合生成沉淀，脱色剂较易通过革兰氏阴性菌的细胞膜，将碘和染料的复合物溶解洗出，故易脱色；阳性菌细胞膜透通性低，故不易脱色。 第三十七页，共四十九页。 甲菌 乙菌 初染 结晶紫 媒染 碘液 脱色 乙醇 复染 沙黄 紫色（G＋） 红色（G-） 革兰氏染色步骤示意图 细胞壁与革兰氏染色 第三十八页，共四十九页。 3.化学学说： 革兰氏阳性菌细胞内含有某种特殊化学成份，一般认为是核糖核酸镁盐与多糖的复合物，它能和料染一煤染剂复合物相互结合，使已着色的细菌不易脱色。 第三十九页，共四十九页。 病原生物学与免疫学实验 病原生物学与免疫学教研室 2004年2月 第一页，共四十九页。 病原生物学与免疫学实验室规则 微生物学实验室是进行微生物培养鉴定及试验的场所，是一个微生物高度集中的区域，为了防止微生物感染人体及扩散，保证安全及每次实验结果的准确性，要求同学遵守下列规则： 第二页，共四十九页。 一般注意事项 进实验室穿上实习衣，离室时脱下，要反折，并经常进清洗。 书包、衣物等勿带入实验室，必要的文具、实验指导，笔记等带入后，也要远离操作部位。 实验室内要保持安静，有秩序，不得高声谈笑，或随便走动以免影响他人实验。 实验室内禁止饮食、吸烟和用嘴湿润铅笔或标签等，也不要以手抚摸头部等部位。 第三页，共四十九页。 做练习要保持无菌操作操作。以防止临床标本及纯培养物的污染， 吸过菌液的吸管、毛细吸管，要投入含有2～3％来苏儿或0.1％新洁而灭液的玻璃筒中，其它带菌材料放在指定地点，以防止微生物污染环境。 若发生吸入菌液，割破手指等事故，应立即报告老师，进行预防处理。 第四页，共四十九页。 爱护公物，节约使用实验材料、器材，如损坏公物，应立即向指导教师报告，登记处理。 实验完毕，应及时清理实验室，做好卫生，关好门、窗、水笼头、电灯。 离开实验室前，应在消毒液中将手浸泡5～10分钟，再用清水洗净。 第五页，共四十九页。 发生意外事故的处理 皮肤破伤：用生理盐水洗净后，涂以2％红汞或2％碘酒。 烧伤：涂以凡士林油，5％鞣酸或2％苦味酸。 化学药品腐蚀伤：若为强酸，先用大量清水冲洗，再以5％碳酸氢钠或5％氢氧化铵溶液中和之；强碱腐蚀则先以大量清水冲洗后，再以5％醋酸或5％硼酸洗涤中和。 第六页，共四十九页。 吸入病原菌菌液：应立即吐人容器内消毒，并用1∶1000高锰酸钾溶液或3％双氧水漱口。 菌液流洒桌面，倾倒适量消毒液于污染面浸泡半小时后抹去，再以清水擦洗干净。 严防火灾：试验完毕立即关闭电闸，煤气阀门，如系酒精，乙醚、汽油等火种，切忌用水，可撒泼大量沙土等扑灭火苗。 第七页，共四十九页。 实验一 细菌的形态学 第一周 第八页，共四十九页。 实验内容 普通光学显微镜的使用 细菌基本形态和特殊结构的观察