利用微滴数字PCR进行BRAF V600E突变与PD-L1表达的相关性分析.pdfVIP

利用微滴数字ＰＣＲ进行ＢＲＡＦＶ６００Ｅ突变与ＰＤＬ１表 达的相关性分析 摘要：目的　探讨ＢＲＡＦＶ６００Ｅ突变与ＰＤＬ１表达的相关性及其表型特征。方法　采用免疫组化ＥｎＶｉｓｉｏｎ两步法对３４例朗 格汉斯细胞组织细胞增生症（Ｌａｎｇｅｒｈａｎｓｃｅｌｌｈｉｓｔｉｏｃｙｔｏｓｉｓ，ＬＣＨ）组织中ＰＤＬ１的表达进行检测；ｑＲＴＰＣＲ和微滴数字 ＰＣＲ （ｄｒｏｐｌｅｔｄｉｇｉｔａｌＰＣＲ，ｄｄＰＣＲ）技术对ＢＲＡＦＶ６００Ｅ表达水平进行定量并比较两种方法的一致性和灵敏度；分析ＢＲＡＦＶ６００Ｅ 携带者的临床病理学特征。结果　ｑＲＴＰＣＲ法检测 ＬＣＨ患者的 ＢＲＡＦＶ６００Ｅ突变率为７６４７％（２６／３４），ｄｄＰＣＲ法为 ８２３５％（２８／３４），两种方法检测的突变率一致性高（Ｋａｐｐａ＝０８２，Ｐ＜０００１），且 ｄｄＰＣＲ灵敏度更高；ＢＲＡＦＶ６００Ｅ高表达者 的ＰＤＬ１表达水平亦增加（ｒ＝０４４，Ｐ＜００５）；ＢＲＡＦＶ６００Ｅ携带者累及多个重要脏器受损。结论　采用ｑＲＴＰＣＲ、ｄｄＰＣＲ法 检测ＬＣＨ组织中ＢＲＡＦＶ６００Ｅ突变率一致性高，且ｄｄＰＣＲ法具有更高的灵敏度；ＢＲＡＦＶ６００Ｅ与ＰＤＬ１表达呈正相关。 关键词：朗格汉斯细胞组织细胞增生症；微滴数字ＰＣＲ；ＢＲＡＦＶ６００Ｅ；ＰＤＬ１；分子诊断 　　朗格汉斯细胞组织细胞增生症（Ｌａｎｇｅｒｈａｎｓｃｅｌｌ 进行靶向治疗，对婴儿期伴有重要器官损伤的患者 ｈｉｓｔｉｏｃｙｔｏｓｉｓ，ＬＣＨ）是一种罕见的血液系统肿瘤，以 收效甚微［４－６］。有研究显示ＬＣＨ微环境中也存在Ｔ ［７］ 朗格汉斯细胞异常克隆性增生为特征。儿童期发病 细胞耗竭现象 ，ＰＤ１／ＰＤＬ１免疫检查点是导致Ｔ 率为４１／１００万，婴儿期发病率可高达 １５３／１００ 细胞功能丧失的主要因素，从而逃避免疫系统的攻 ［１］ 击［８－１１］。通过阻断ＰＤ１／ＰＤＬ１信号通路，可以逆 万 。接受联合化疗方案的患者５年复发率高达 ［２］ ［１２］ ３０％～４０％ ，ＢＲＡＦＶ６００Ｅ突变引起的ＲＡＦ／丝裂 转Ｔ细胞功能的耗竭 。本实验重点分析ｄｄＰＣＲ 原活化蛋白激酶（ｍｉｔｏｇｅｎａｃｔｉｖａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎｋｉｎａｓｅｓ， 技术检测ＬＣＨ组织中ＢＲＡＦＶ６００Ｅ突变的效果，旨 ［３］ 在探讨儿童 ＬＣＨ组织中ＢＲＡＦＶ６００Ｅ突变与ＰＤ ＭＡＰＫ）通路异常活化是致病的主要原因 ，应用 ＢＲＡＦＶ６００特异性抑制剂（维罗非尼和达拉非尼） Ｌ１表达的相关性，为联合药物应用靶向治疗提供理 论依据。 １　材料与方法 １．１　材料　收集２０１２年１月～２０２０年６月南昌大 学附属儿童医院／江西省儿童医院诊治的 １００例 ＬＣＨ患儿，诊断及疗效标准依照《儿科学》及《血液 ［１３－１４］ 病诊断及疗效标准》 。选取不超过３年且保存 完好的石蜡组织切片３４例。 １．２　主要试剂　免疫组化抗体购自福州迈新生物 ＨＥＲ２０－３＋ｃａｓｅｓｗｅｒｅ２４％ （０－１５％），３１％ （０－ ｔｈｅｃｏｎｓｔｉｔ