第十五章　免疫细胞功能检测技术.docVIP

第十五章　免疫细胞功能检测技术 　　第一节 淋巴细胞的功能检测　　第二节 吞噬细胞功能检测技术　　第三节 免疫细胞功能检测的临床应用　　免疫细胞大致可分为两类，　　一类能识别特异性抗原，一旦被激活则显示出特异性应答的功能，主要指淋巴细胞群，包括T细胞、B细胞、NK细胞、K细胞等；　　另一类能捕获抗原，处理抗原，以一定方式提呈给淋巴细胞或表现其他免疫功能，包括中性粒细胞、巨噬细胞、树突状细胞等。　　 第一节　淋巴细胞的功能检测 　　淋巴细胞功能测定可分为体内试验和体外试验。　　体内试验主要是进行迟发型超敏反应，借此间接了解淋巴细胞对抗原、半抗原或有丝分裂原的应答反应。　　体外试验主要包括淋巴细胞对抗原或有丝分裂原刺激后的增殖反应、细胞毒性试验及淋巴细胞分泌产物的测定。 　　一、T细胞功能检测　　（一）T细胞增殖试验　　1.原理 　　T细胞在体外受到有丝分裂原或抗原的刺激后，细胞的代谢和形态发生变化，主要表现为胞内蛋白质和核酸合成增加，发生一系列增殖反应，如细胞变大、胞质增多、胞质出现空泡、核染色质疏松、核仁明显，并转化为淋巴母细胞。　　2.刺激物　　　体外刺激T细胞增殖反应的刺激物包括植物血凝素（PHA）、刀豆素A（ConA）和美洲商陆（PWM）、白喉类毒素、破伤风类毒素、纯化蛋白衍生物（PPD）和白色念珠菌。　　3.方法学　检测T细胞增殖反应的方法有： 　　（1）形态学检查法：形态学方法简便易行，普通光学显微镜便能观察结果，适于基层实验室应用。缺点是依靠肉眼观察形态学变化，判断结果易受主观因素影响，重复性和准确性较差。　　（2）3H-TdR掺入法：3H-TdR掺入法敏感性高，客观性强，重复性好，但需一定设备条件，同时还存在放射性核素污染问题。　　（3）MTT比色法：本方法的敏感性虽不及3H-TdR掺入法，但操作简便，无放射性污染。　　（二）T细胞分泌功能测定　　体外培养的T细胞经各种丝裂原或抗原刺激后，分泌各种细胞因子，可借助免疫学、细胞生物学及分子生物学技术分别检测细胞因子的含量、生物学活性和基因表达水平，以反映T细胞功能。 　　（三）T细胞介导的细胞毒试验　　T细胞介导的细胞毒试验是细胞毒性T细胞的特性，凡致敏T细胞再次遇相应靶细胞抗原，可表现出破坏和溶解靶细胞，它是评价机体细胞免疫水平的一种常用指标。　　该试验原则是选用适当的靶细胞（常用可传代的已建株的人肿瘤细胞，如人肝癌、食管癌、胃癌等细胞株），经培养后制成一定浓度的细胞悬液，按一定比例与待检的淋巴细胞混合，共温育一定时间，观察肿瘤细胞杀伤的情况。　　（四）体内试验　　正常机体对某种特殊抗原建立了细胞免疫后，如用相同的抗原做皮肤试验，常可出现阳性的迟发型超敏反应。 　　本试验不仅可以检查受试者是否对某种抗原具有特异性细胞免疫应答能力，而且可以检查受试者总体细胞免疫状态：目前临床上常用于诊断某些病原微生物感染（结核、麻风等）和细胞免疫缺陷等疾病，也常用于观察细胞免疫功能在治疗过程中的变化及判断预后等 　　1.特异性抗原皮肤试验 常用的特异性抗原皮肤试验为结核菌素皮肤试验。 　　2.PHA皮肤试验 将定量PHA注射到受试者前臂皮内，可非特异性刺激T细胞发生母细胞转化，呈现以单个核细胞浸润为主的炎性反应。PHA皮肤试验敏感性高，比较安全可靠，临床常用于检测机体的细胞免疫水平。 　　二、B细胞功能检测　　（一）B细胞增殖试验　　小鼠B细胞可用细菌脂多糖（LPS）作为刺激物，人则用含SPA的金黄色葡萄球菌菌体及抗IgM抗体等刺激。 　　（二）溶血空斑试验　　1.原理 　　将SRBC免疫的小鼠脾脏（或家兔淋巴结）制成单个细胞悬液，与SRBC在琼脂糖凝胶内混合后倾注于小平皿或玻片上。脾细胞中的抗体生成细胞释放抗SRBC抗体，使其周围的SRBC致敏，在补体参与下可将SRBC溶解，形成肉眼可见的溶血空斑。 　　每一个空斑中央含一个抗体形成细胞，空斑数目即为抗体形成细胞数。 　　空斑大小表示抗体形成细胞产生抗体的多少。 　　2.方法学　　（1）经典溶血空斑形成试验 　　用于检测实验动物抗体形成细胞的功能。　　直接法所测到的细胞为IgM类抗体形成细胞。 　　间接法，即在小鼠脾细胞和SRBC混合时，再加抗鼠Ig抗体（如兔抗鼠Ig），使抗体产生细胞所产生的IgG或IgA与抗Ig抗体结合成复合物，此时能活化补体导致溶血。 　　（2）被动溶血空斑试验 　　指抗体形成细胞产生的Ig与SRBC上的抗原结合，在补体参与下出现溶血反应。 　　将吸附有已知抗原的SRBC、待检B细胞、补体及适量琼脂糖液混合，倾注平皿，温育1～3小时后，形成肉眼可见的溶血空斑。 　　3.临床应用与评价 　　溶血空斑试验主要用于