动物细胞培养和核移植技术 教学设计.docxVIP

2. 2.1动物细胞培养和核移植技术 ★新课标要求.简述动物细胞培养的过程、条件及应用。 .简述通过动物体细胞核移植技术克隆动物的过程和应用前景。 .举例说出动物细胞融合与单克隆抗体的原理和应用。 ★教学重点（1）动物细胞培养的过程及条件。 （2）用动物体细胞核移植技术克隆动物的过程。 （3）单克隆抗体的制备和应用。 ★教学难点（1）用动物体细胞核移植技术克隆动物的过程。 （2）单克隆抗体的制备过程。 ★教学方法诱思法、分析法、归纳法。 ★教学工具多媒体教学课件 ★课时安排 2课时★教学过程 （一）引入新课 利用植物细胞可以培育成植物体，那么，你利用动物细胞能不能大量繁殖动物体.，以 提高繁殖率呢？这节课我们来学习动物细胞工程（二）进行新课 ［问题］动物细胞.工程的常用技术手段有哪些？最基础的技术手段是什么？ 动物细胞培养、动物细胞核移植、动物细胞融合、生产单克隆抗体等。最基础的技术手段是 动物细胞培养。 .动物细.胞培养. 1概念：从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后，放在适宜的培养基 中，让这些细胞生长和增殖。 殖。1.2动胞培养的［分析］（1）需分散成单个细胞；（2）需要在培养基上培养：（ 殖。 1.2动 胞培养的 I剪碎、胰蛋白酶处理 物细分散成单个细胞I 细胞悬液 I转入培养液原代培养 I胰蛋白酶处理过程：（学生自学总结） ［问题］什么是细胞贴壁？什么是接触抑制？ 悬液中分散的细胞很快就贴附在有丝分裂，称为细胞贴壁。当贴壁细胞分裂生长到表面相互 接触时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细?胞的接触抑制9［问题］如何打破接触抑制? 需要重新用胰蛋白酶等处理，然后分别继续培养，让细胞继续增殖。 ［问题］细胞传代培养代数有什么特点？ 传代培养的细胞一般传至10代后就不易传下去了，一般来说，细胞在传至10?50代左右时, 增殖会逐渐缓慢，以至于完全停止，这时部分细胞的细胞核型可能发生变化，当继续传代 培养时，少部分细胞会克服细胞寿命的自然极限，获得不死性。所以目前使用的或冷冻保存 的正常细胞通常为1（）代以内，以保持细胞正常的二倍体核型。 .3动物细胞培养的条件（1）无菌、无锋的环境 （2）营养：合成培养基成分包括糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素.等，通常还 需加入血清、血浆等一些天然成分。 （3）温度和pH：适宜温度一般与动物的体温相近；pH为7. 2?7. 4。 （4）气体环境：95%空气和5%CO?混合气体。 ［问题］如何保证无菌、无毒环境？ （1）对培养液和所有培养用具进行无菌处理；（2）通常还需要在细胞培养液中添加一定量 的抗生素；（3）应定期更换培养液，以便清除代谢产物，防止细胞代谢产物积累对细胞自身 造成危害。 1. 4动物细胞培养技术的应用（1）可大规模生产一些有重要价值的生物制品。 （2）培养的动物细胞可作为基因工程中常用的受体细胞。 （3）培养的动物细胞可川于检测有毒物质，判断某种物质的毒性（根据变异率）。 （4）培养正常或病变细胞，用于生理、病理、药理等方面的研究。 ［填表比较1. 植物组织培养和动物细胞培养的比较 植物组织培养 动物细胞培养 原理 细胞全能性 细胞增殖 培养基性质 固体培养基 液体培养基 培养基特有成分 蔗糖、植物激素 葡萄糖、动物血清 培养结果 植物体 细胞株、细胞系 培养目的 快速繁殖、培育无病毒植株等 获得细胞或细胞产物 2.动物体细胞核移植技术和克隆动物 ［问题］为什么不能直接利用动物细胞培育动物体？ 动物细胞的全能性会随着动物细胞分化程度的提高而逐渐受到限制，分化潜能逐渐变 弱。因此，需要借助核移植来实现。 概念：是将动物的一个细胞的细胞核，移入一个已经，去掉细胞核的卵母细胞中，使 其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育为动物个体。 ［分析］3）移植的是动物细胞的细胞核；（2）利用去核卵.母细胞作为受体细胞；（3） 重组细胞需培育成一个新的胚胎。 2. 1体细胞核移植的过程: 课件显示过程，讲解。 ［讲解］（1）卵母细胞的采集：从屠宰场收集牛卵巢，在体外培养到减数第二次分裂中 期。 （2）供体细胞的采集：从供体取体细胞进行培养。 （3）供体的细胞核移入去核卵母细胞中，其实质是将去核卵母细胞与供体细胞进行细胞融合，一般采用电激法使细胞融合，所以子代的细胞质基因来自于两个亲本。 （4）供体核进入受体卵母细胞后，还需要物质或化学方法激活受体细胞，使其完成减数分裂.，因为所选用的受体细胞是处于减数第二次分裂中期的卵母细胞，减数分裂还没有进行完。 （5）重组细胞在体外发育成重组胚胎，将早期胚胎移植到受体母牛体内。 （6）代孕母牛生出克隆牛。 ［问题］受体细胞为什么选用卵母细胞？ 因为卵母细胞体枳大，易操作，而且含有促使细胞核表达全能性的某种物质和营