基因分析的基本策略课件.pptVIP

实时PCR原理是：在PCR反应体系中加入一种双色荧光标记的寡核苷酸探针，并根据探针上荧光信号的变化计算模板DNA含量。如：TaqMan系统。 在寡核苷酸探针的5`端标记一个报告荧光染料，3`端标记一个猝灭染料。当光源照射到探针时，被激活的报告荧光染料将能量转移给附近的猝灭染料而不发光。 当PCR产物扩增时，聚合酶遇到结合在模板上的荧光探针时，利用聚合酶所具有的5`-3`外切酶作用，将两种染料分离，因此根据报告荧光所发射的荧光强度与被切探针成正比，由此可以计算出PCR产物的含量。 第三十一页，共五十三页。 第三十二页，共五十三页。 实时PCR技术特别适合于低拷贝基因的定量。 实时PCR需要包括热循环仪、计算机、光学仪器用于荧光激发和收集器、数据处理和分析软件。 第三十三页，共五十三页。 ROMA分析基因拷贝数 ROMA（代表性寡核苷酸阵列分析）：是将RDA与芯片微距阵分析技术相结合。 利用人类基因组序列预测并设计了能与代表性片段杂交的寡核苷酸探针，制成芯片，然后与RDA筛选出来的代表性差异PCR产物在芯片上进行杂交，用计算机分析杂交结果。 第三十四页，共五十三页。 核酸保持在细胞或组织切片中，经适当方法处理细胞或组织后，将标记的核酸探针与细胞或组织中的核酸进行杂交，称为原位杂交。 原位杂交不需要从组织提取核酸，对组织中含量极低的靶序列有很高的灵敏度，并可完整保持组织与细胞形态，更