实验血清总脂含量测定.pptxVIP

实验血清总脂含量测定温度对酶活力的影响0℃ 37 ℃ 100 ℃0℃ 37 ℃ 100 ℃100℃ 0 ℃ 37 ℃0℃ 37 ℃ 100 ℃ 100℃ 0 ℃ 37 ℃100℃ 37 ℃ 0 ℃100℃ 37 ℃ 0 ℃作用时间、酶的活性高低、量多少对结果的影响激活剂和抑制剂对酶活性的影响酶的高效性0、9% 1% H2ONaCl CuSO4 Fe熟马铃 生马铃 空白 薯糜 薯糜 对比 0℃ 37 ℃ 100 ℃ 3、8 6、8 8、00、9% 1% H2ONaCl CuSO46、高温对结果的影响 淀粉的结构:天然的淀粉有直链淀粉和支链淀粉,直链淀粉的二级结构(指多糖链的折叠方式)是一个左手螺旋,每圈螺旋含6个残基,螺距0、8nm,直径1、4nm。 淀粉的螺旋结构并不十分稳定。当不与其他分子如碘相互作用时,直链淀粉特别估计是以无规卷曲形式存在。碘分子正好能嵌入螺旋中心空道,每圈可容纳一个碘分子(I2),通过朝向圈内的羟基氧(提供未共享电子对)和碘(提供空轨道)之间的相互作用形成稳定的深蓝色淀粉和碘络合物。产生特征性的蓝色需要约36个即6圈的葡萄糖残基。(见书81页) 支链淀粉螺旋(约25-30个残基)中的短串碘分子比直链淀粉螺旋中的长串碘分子吸收更短波长的光,因此支链淀粉遇碘呈紫色到紫红色。7、酶实验必须控制哪些条件？ 酶的化学本质是蛋白质,它极易受外界条件的影响而改变它的构象及性质,因而也必定会影响到它的催化活性。酶对温度、 pH、酶浓度及某些离子浓度等变化特别敏感。(1)pH值对酶活性的影响 酶的活性受环境pH的影响极为显著,通常各种酶只有在一定的pH范围内才能表现出它的活性。一种酶表现其最高活性时的 pH值称为该酶的最适pH。高于或低于最适pH值时,酶的活性降低。酶的最适pH值受酶的纯度、底物的种类和浓度、缓冲液的种类和浓度以及环境温度等条件影响。 (2)温度对酶活性的影响 每种酶都有其最适温度,高于或低于此温度酶的活性都降低。一般而言,若酶处于过高的温度环境中,会使酶活性永久地丧失;而若处于极低温度的环境中只会使酶活性受到抑制,一旦温度适宜,酶又会全部或部分地恢复其活性。(3)酶浓度对酶促反应速度的影响 在其它条件不变的情况下,若反应物浓度大大高于酶浓度时,则反应速度随酶浓度增加而增加,两者间成正比关系,即:V=k[E]。但若反应底物浓度较低,而且酶的浓度足够高时,增加酶浓度,反应速度基本不变。 (4)离子对酶活性的影响 就唾液淀粉酶而言,低浓度Cl一能够增加酶活性,高浓度的Cl一或者低浓度的Cu2+则会抑制酶的活性,而低浓度的Na+、SO42-等对酶活性没有影响。不同的酶对不同的离子具有不同的效应。 二、血糖的测定1、实际用量减半2、结果分析(两个样本值的比较,与健康家兔的比较80-120mg/100mL,结果偏高与氧化的关系判断错误)3、测定管颜色深浅的处理(稀释！)4、定性实验仪器型号的记录5、实验改进:标准曲线的制作实验过程中的问题: 1、协作实验、合理分工 2、损坏物品登记及处理 3、移液器使用:用完后调到量程的最大值,按组放好。 4、试管、试剂瓶清洗 5、实验结束后:检查移液器数量、装配枪头、整理桌面及试剂,试管、三角瓶等洗净后按规格分装及白瓷盘中烘干,擦净桌面及试剂架,老师或研究生检查后才能离开。 6、值日生按值日表执行,负责打扫及协助试剂的分装等工作。 7、预习报告抽检:老师随机抽查并记分。 8、实验报告写明姓名、班级、学号,学委按序排列后在实验结束后的第三天上交。实验五 血清总脂含量测定 (香草醛法) 一、实验目的掌握香草醛法测定总脂的原理和方法 。二、实验原理血清中的脂类,尤其是不饱和脂类与浓硫酸共热作用,经水解后生成碳正离子,试剂中的香草醛与浓磷酸的羟基作用生成芳香族的磷酸酯,由于改变了香草醛分子中的电子分配,使醛基变成活泼的羰基。此羰基即可与碳正离子起反应,生成红色的醌化合物,其强度与碳正离子成正比。碳正离子磷酸酯红色的醌化合物羰基香草醛法 优点: (1)采纳胆固醇(或橄榄油)作标准的测定法,结果比较接近实际情况。 (2)方法简易,常用方法。 缺点:不能准确测定总脂含量。 (不饱和脂类比饱和脂类呈色强。血清中饱和脂类 与不饱和脂类的比例约为3:7。要测定血清的标 准总脂含量最好选用称量法。)三、仪器、材料和试剂(一)实验仪器 可见光分光光度计,恒温水浴锅,移液枪等(二)实验试剂(1)胆固醇标准液(6mg/mL) (2)香草醛显色剂 (3)浓硫酸(AP)(4)浓磷酸(AP)(5)生理盐水 (三)实