酶工程-实验4超滤、离子交换层析提取纯化木瓜凝乳蛋白酶.pptxVIP

实验四 离子交换层析、超滤分 离纯化木瓜凝乳蛋白酶§1.离子交换层析分离木瓜凝乳蛋白酶§2.超滤法纯化浓缩木瓜凝乳蛋白酶§3.木瓜凝乳蛋白酶的定量测定及纯度检测木瓜凝乳蛋白酶的特性pI=10.4分子量：26KD最适pH=7最适反应温度是37℃。§1.离子交换层析分离木瓜凝乳蛋白酶离子交换层析属于柱层析的一种，常用柱层析技术:凝胶层析亲和层析离子交换层析 是三种分离蛋白质的经典层析技术。一、实验目的 1、了解常用柱层析的种类及其原理。 2、掌握超滤浓缩纯化蛋白的方法和原理。 3、掌握离子交换层析的原理和方法。 4、掌握SDS-凝胶电泳检测酶蛋白的应用。二、实验原理1、离子交换层析：固定相是用稀酸或稀碱处理后，成为载有大量电荷（H+或OH-）的交换剂。流动相是具有一定pH值和离子强度的电解质溶液。2、离子交换层析按其所带电荷性质分为： 阴离子交换剂 阴离子交换层析 阳离子交换剂 阳离子交换层析 pH pI时被阳离子吸附 pH pI时被阴离子吸附。3、常用离子交换剂有：离子交换树脂，离子交换纤维素等本实验采用阳离子交换层析方法。二、试剂材料1、醋酸-醋酸钠缓冲液，pH5.0 初始缓冲液：0.015M 层析缓冲液： 0.3M和1.0M2、再生溶液：0.5M NaOH，0.5M HCl 3、酶稀释液：0.53gL-半胱氨酸盐酸盐，EDTA0.22g，分别加少量水