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第一页，共二十六页，2022年，8月28日 1、检测外源基因在植物细胞中的转录，对外源基因表达调控进行研究，掌握引物的选择、cDNA的合成、RT-PCR检测的原理与方法。 。 实验目的 第二页，共二十六页，2022年，8月28日 第三页，共二十六页，2022年，8月28日 第四页，共二十六页，2022年，8月28日 第五页，共二十六页，2022年，8月28日 第六页，共二十六页，2022年，8月28日 第七页，共二十六页，2022年，8月28日 第八页，共二十六页，2022年，8月28日 第九页，共二十六页，2022年，8月28日 第十页，共二十六页，2022年，8月28日 第十一页，共二十六页，2022年，8月28日 第十二页，共二十六页，2022年，8月28日 第十三页，共二十六页，2022年，8月28日 第十四页，共二十六页，2022年，8月28日 第十五页，共二十六页，2022年，8月28日 1、材料： 转基因植物的RNA或mRNA制备物。 非转化的植株材料总RNA或mRNA制备物 2、设备：PCR仪、移液器、PCR管等。 3、试剂：10×RT缓冲液、dNTP、逆转录酶、 引物（随机引物，Oligo dT; 特异引物)、 10×One Step RNA PCR Buffer、25 mM MgCl2、10 mM dNTP、RNase Inhibitor (40 U/μl)、AMV-Optimized Taq1 μl、AMV RTase XL (5 U/μl)、上游特异Primer (20 μM)*1、下游特异Primer (20 μM)*2、RNase Free H2O。 实验材料、设备及试剂 第十六页，共二十六页，2022年，8月28日 实验操作步骤： 1）RNA提取： 关键 防止RNA降解 RNA提取的成功与否 是RT-PCR检测中最 重要的步骤。 第十七页，共二十六页，2022年，8月28日 2、cDNA第一链的合成： 取1个0.2ml的PCR管，依次加入下列试剂： 10×PCR Buffer 1 μl RNase Free dH2O 5.75 μl dNTP 1 μl RNase Inhibitor 0.25 μl AMV RTase Transcriptase 0.5 μl oligo dT-Adaptor primer 0.5 μl RNA 1μl Total 10μl 实验步骤 第十八页，共二十六页，2022年，8月28日 反应条件： 42 ℃ 30min 99 ℃ 5min 5 ℃ 5min 第十九页，共二十六页，2022年，8月28日
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