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氯化血红素的制备及含量测定 实验目的 1、掌握氯化血红素制备的原理。 2、了解血红素的药用价值。 实验原理 血红素（heme）是高等动物血的红色素，由原卟啉与Fe2+ 结合而成，它与珠蛋白结合成血红蛋白。在体内的主要生理功能是载氧，帮助呼出 CO ，另外它还是 2 cty P450、cty c、过氧化酶的辅基。 血红素不溶于水，溶于酸性丙酮及碱性水中，在溶液中易形成聚合物，临床上常用作铁强化剂和抗贫血药及食物中色素添加剂，另外可用于制备原卟啉来治疗癌症。 氯化血红素(hemin)的制备实验室常用酸性丙酮分离提取法，使血球在酸性丙酮中溶血，抽提后再经浓缩、洗涤、结晶得到氯化血红素。 工业上制取氯化血红素常用冰乙酸结晶法，血球用丙酮溶血后，制取血红蛋白， 再用冰乙酸提取。在氯化钠存在下，氯化血红素沉淀析出。 卟啉环系化合物在 400nm 处有强烈吸收，称 Soret 带，最大吸收波长对各种卟啉化合物是特征的，但溶剂对最大吸收波长也有影响，采用 0.25%碳酸钠作溶剂。在 600nm 处有特征吸收峰，光吸收值与氯化血红素浓度的关系符合朗比定律。 实验材料 1、器材 （1）烧杯 1000ml 1 只 500ml 2 只 250ml 2 只 （2）抽滤瓶 500ml 1 只 布氏漏斗 8cm 1 只 三颈瓶 500ml 1 只 电动搅拌机 1 台 球形冷凝管 30cm 1 只 （7）温度计 200℃ 1 支 离心机 1 只 分液漏斗 500ml 1 只 小试管 20 只 2、试剂 （1）新鲜猪血 500ml； （2）0.8%柠檬酸三钠 20ml 丙酮 冰乙酸 氯化钠（固体） 氯化钾（固体） 浓盐酸 （8）20%氯化锶 （9）0.25%碳酸钠 实验方法 1、酸性丙酮抽提 0.8%柠檬酸三钠抗凝猪血 200ml，离心（3000r/min）15min，倾去上层血浆， 制得血球，加 2-3 倍的蒸馏水，充分溶胀后，沸水浴 20-30min，纱布过滤，滤渣加入含 3%盐酸的丙酮溶液 200ml，振摇抽提 30min，抽滤，将滤液用旋转蒸发仪浓缩至原体积的 1/3-1/4，加入 20%氯化锶至终浓度 2%，静置 15min，离心10min，沉淀用水、95%乙醇、乙醚各洗涤一次，真空干燥后得氯化血红素粗品， 称重，计算收率。 2、含量测定 取标准氯化血红素，用 0.25%碳酸钠配制成浓度 0.08mg/ml 备用。取制备所得氯化血红素，用 0.25%碳酸钠配制成 0.1 mg/ml 备用。按下表稀释，在 600nm 处测定 OD，以 0.25%碳酸钠溶剂作空白，根据所得数据，计算氯化血红素含量。 标准氯化血红素 制备血红素 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 Hemin 溶液 0 0.4 0.8 1.2 1.6 2.0 2.4 2.8 3.2 3.6 4.0 1.0 2.0 3.0 0.25%碳酸钠(ml) 4.0 3.6 3.2 2.8 2.4 2.0 1.6 1.2 0.8 0.4 0 3.0 2.0 1.0 Hemin 含量（mg/ml 0 OD 600nm