基因工程学案知识点-高二下学期生物人教版（2019）选择性必修3.docxVIP

第一章 基因工程 一、基因工程的基本工具 1．限制性核酸内切酶(也称“限制酶”)——“分子手术刀” (1)来源：主要来自原核生物。 (2)种类：约4 000种。 (3)特点： ①识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列。 ②切割特定核苷酸序列中的特定位点。 (4)作用：断裂特定的两个核苷酸之间的磷酸二酯键。 (5)结果：产生黏性末端或平末端。 2．DNA连接酶——“分子缝合针” 种类 E?coli DNA连接酶 T4DNA连接酶 来源 大肠杆菌 T4噬菌体 特点 缝合（黏性）末端 缝合（黏性）末端和（平）末端 作用 缝合双链DNA片段，恢复两个核苷酸之间的磷酸二酯键 3.基因进入受体细胞的载体——“分子运输车” (1)种类 ①质粒：常存在于原核细胞和酵母菌中，是一种分子质量较小的、环状的、裸露的DNA分子，独立于拟核之外。 ②λ噬菌体的衍生物和动植物病毒等。 (2)目的 ①将目的基因转运到宿主细胞中去。 ②在受体细胞内对目的基因进行大量复制。 (3)必备条件 ①在宿主细胞中保存下来并大量复制。 ②有多个限制酶切割位点。 ③有一定的标记基因，便于筛选。 ④对受体细胞无害，大小适宜。 二、基因工程基本操作程序 1.目的基因的获取 (1)目的基因：主要是 编码蛋白质 的基因 ，也可以是一些具有 调控作用 的因子 (2)获取的方法： ①从 基因文库 中获取目的基因 A. 基因组文库 ：含有某种生物的 全部 基因的文库 B. 部分基因文库：含某种生物的 部分 基因的文库，如cDNA文库 ②利用PCR技术扩增目的基因： A.PCR的全称为 聚合酶链式反应 ，是一项在生物 体外复制 特定DNA片段的核酸合成技术。 B.原理是 DNA复制 C.条件：a.模板即 一段已知目的基因的核苷酸序列 b. 引物 c. Taq酶 （耐高温的DNA聚合酶） d.四种脱氧核苷酸 ③化学方法直接人工合成目的基因（根据氨基酸序列合成DNA） 适用范围：适用于 基因较小、核苷酸序列又已知的 目的基因的获取 2.基因表达载体的构建（基因工程的 核心 ） (1)目的：①使目的基因在受体细胞中 稳定存在 ，并可以 遗传给下一代 ， ②同时使目的基因能 表达 和发挥作用 (2)基因表达载体的组成 ①启动子：是RNA聚合酶识别和结合的位点，驱动基因转录mRNA；位于基因首端 ②目的基因：能编码出人们所需要的蛋白质的基因 ③终止子： 终止合成mRNA ；位于基因的尾端 ④标记基因：鉴别受体细胞中 是否含有目的基因 ，从而将含有目的基因的细胞 筛选出来 3、目的基因导入受体细胞 将目的基因导入受体细胞 是实施基因工程的第三步。 目的基因 进入受体细胞，并且在受体细胞内 维持稳定 和 表达 的过程，称为转化。 1.将目的基因导入植物细胞 ⑴方法： 农杆菌转化法 、 基因枪法 、 花粉管通道法 。 ⑵农杆菌转化法机理： 农杆菌 易感染 双子叶植物 和裸子植物，对多数 单子叶 植物没有感染力。当植物体受损伤时，伤口处的细胞会分泌大量 酚类化合物 ，吸引 农杆菌 移向这些细胞。这时农杆菌中的Ti质粒上的 T-DNA 可转移至受体细胞，并整合到受体细胞染色体的 DNA上 。 2.将目的基因导入动物细胞 ⑴常用方法： 显微 注射技术。 3.将目的基因导入微生物细胞 ⑴由于原核生物 繁殖快 、多为 单细胞 、 遗传物质 相对较少等，因此，早期的基因工程操作都用原核生物作为受体细胞。 ⑵感受态法：首先用 Ca2+ 处理细胞，使细胞处于一种能 吸收周围环境中DNA分子的生理状态，这种细胞称为 感受态细胞 。第二步是将 重组表达载体DNA分子 溶于缓冲液与感受态细胞混合，在一定温度下促进 感受态细胞 吸收DNA分子。 4、目的基因的检测与鉴定 1.检测及方法 ⑴检测转基因生物的染色体DNA上 是否插入了目的基因 ，这是目的基因能否在 受体细胞 中稳定遗传的关键。检测方法是采用 DNA分子杂交技术 。 ⑵检测目的基因是否转录出 mRNA ，这是检测目的基因 是否发挥功能作用 的第一步。采用 分子杂交技术 。 ⑶检测目的基因是否翻译成 蛋白质 ，使用 抗原-抗体杂交 。 鉴定：除了上述的分子检测外，有时还需要进行 个体生物学水平 的鉴定。如抗虫，抗病鉴定等。 三、蛋白质工程流程图 （1）① 转录 ；② 翻译 ；③ 折叠 ；④ 分子设计；⑤ DNA合成 （2）代表蛋白质工程操作思路的是 ④⑤；代表中心法则内容的是 ①②③（填序号） （3）蛋白质工程的基本途径：预期蛋白质功能→设计预期的蛋白质结构→推测应有的氨基酸序列→找到对应的脱氧核苷酸序列。 17.蛋白质工程的概念：是指以蛋白质分子的结构规律及其生物功能