维生素类药物的分析3.pptVIP

★ ★气相色谱法(ChP) 六十年代起开始研究维生素E的气相色谱法(GLC). GC特点 选择性好 灵敏度高 速度快 分离效能好 挥发性低、不稳定、极性强→衍生化 易受样品蒸气压限制 现在是31页\一共有66页\编辑于星期三 气相色谱法(GLC)测定维生素E的优点 可分离维生素E、其异构体及杂质，可选择性地测定维生素E 。适宜测定纯度不高的维生素E及维生素E制剂。 中国药典测定维生素E及维生素E制剂均采用气相色谱法。 现在是32页\一共有66页\编辑于星期三 VitE测定的色谱条件 载气→N2 ★固定液→50%苯基—甲基硅酮（OV-17） 或HP-1 柱温→265℃ 检测器→氢火焰离子化检测器(FID) ★内标→正三十二烷 现在是33页\一共有66页\编辑于星期三 内标法 供试液（样品+内标） 内标物 对照液（对照+内标） 是样品中不存在的物质 与被测组分峰靠近 能与各组分完全分离 与被测组分的量接近 现在是34页\一共有66页\编辑于星期三 系统适用性试验： n ≥ 500（按维生素E 计算） R≥2 （维生素E与内 标物正三十二烷的分 离度 ） 现在是35页\一共有66页\编辑于星期三 ★定量法: 内标法加校正因子 1 K A A = 内 对 2 K A A = 内 样 实际工作中的计算方法 本品含C31H52O3应为 96.0 ~ 102.0% 现在是36页\一共有66页\编辑于星期三 其他药典方法： BP（2000） GC 内标 正三十二烷 R≥1.4 USP （24） GC 内标 十六酸十六醇酯 R≥1.0 JP（14） HPLC 测定dl－α－生育酚[JP（14） 中的维生素E] 外标法 现在是37页\一共有66页\编辑于星期三 JP （15） RP - HPLC外标法简介 样品、外标→ dl－α－生育酚 固定相→十八烷基硅烷键合硅胶（ODS） 流动相→甲醇-水（49 ：1） 检测波长→292nm（吸收峰肩峰） R＞2.6 RSD≤0.8% 对 样 对 生育酚 H H m W × = 现在是38页\一共有66页\编辑于星期三 维生素E的荧光分光光度法 （一）荧光反应法 原理：维生素E的硝酸反应。 利用硝酸将氧化为生育红，再将这一产物和邻苯二胺在冰醋酸中缩台，缩台物在紫外光照射下发生绿色荧光。以F—C定量。 现在是39页\一共有66页\编辑于星期三 维生素E的荧光分光光度法 二、新分析技术的应用——同步扫描直接（内源）荧光法 [原理]： 维生素大多含有芳香环结构（大的共轭?键结构），本身具有较强的天然荧光，因此可以利用内源荧光检测维生素。 如血液中维生素A 345nm激发，490nm处测量。 维生素E 295nm激发，325nm处测量。 现在是40页\一共有66页\编辑于星期三 直接295nm激发，325nm处测量。 则溶剂Raman光谱严重干扰测定! (教材图14-6) 同步荧光扫描技术（可变角同步扫描技术） 90年代Clark等人近年提出的新技术， 可以减小了散射光的影响，改善由常规荧光扫描所无法分开的光谱重叠体系的分辨率。 分类： 1.“固定波长同步扫描荧光测定”——维生素E的荧光法使用 2.“固定能量同步扫描荧光测定” 3.“变角同步扫描荧光测定 ” 现在是41页\一共有66页\编辑于星期三 Stoke位移 现在是42页\一共有66页\编辑于星期三 扫描过程中使激发波长（?ex）和发射波长（?em） 彼此间保持固定的波长间隔 ?em- ?ex=常数 （本实验中△?为 40nm ） 定量依据: FSL = 2.3KCLI0X I0由Fex（?em - ??）决定、X由Fem（?em）决定 现在是43页\一共有66页\编辑于星期三 FSL = 2.3KCLI0X由Fex（?em - ??）与Fem（?em）的乘积决定 在△?保持固定的情况下，同步荧光的信号强度便与待测物质的浓度成正比 实验确定△?的原则: 1.能消除或减小溶剂Raman光干扰 2.兼顾方法灵敏度 3.一般推荐选择等于（或大略于）Stoke位移的△?. 优点:有望获得同步荧光信号最强、半高宽度最小的单峰同步荧光光谱。 现在是44页\一共有66页\编辑于星期三 维生素类药物的分析方法总结 ★[结构特点与分析方法的关系归纳总结] 要求记住六种维生素药物的结构式特征 现在是45页\一共有66页\编辑于星期三 本类药物重要结构特点及反应比较 1．共轭多烯结构：具有紫外吸收， （1）可采用紫外吸收光谱法进行鉴别， VitA 、B1 、C、D、E （2）可采用紫外分