疾病与基因基础知识概述.pptVIP

疾病與基因 第一页，共四十页。 摘要 基因製圖 複製疾病基因 癌症 基因療法 第二页，共四十页。 Introduction 複製基因的方法有很多種 基因製圖(gene mapping): 決定基因在染色體的位置 染色體步移(chromosome walking) 複製基因 第三页，共四十页。 基因製圖 第四页，共四十页。 基因製圖 遺傳製圖(genetic mapping) 物理製圖(physical mapping) 第五页，共四十页。 遺傳製圖-Ⅰ 決定疾病基因 分析基因之間在遺傳上的連鎖性(linkage) 標記DNA的相對位置 決定出基因在染色體位置 在減數分裂時,染色體分配到子細胞的方式是完全隨意 位於不同染色體的兩個基因不一定會傳到子細胞 第六页，共四十页。 遺傳製圖-Ⅱ 兩個基因被連鎖(linked) 兩個基因位於相同的染色體,會一起被傳至子細胞 減數分裂時有可能發生DNA互換 經過互換之後,位於同一個染色體的基因座可能會被分離 第七页，共四十页。 遺傳製圖-Ⅲ 基因座(locus) 基因在染色體的位置 兩個基因做距離越遠,發生重組的機率愈高 基因座之間的距離以centiMorgan(cM)為單位 基因座欲發生重組,互換點(chiasma)必須位於兩個基因座之間 距離愈遠愈可能發生重組 第八页，共四十页。 遺傳製圖 (a) 第九页，共四十页。 疾病基因定位 已知位置的一段DNA作為標記(marker) 再從家族譜系(pedigree)分析重組機率 4 第十页，共四十页。 物理製圖 決定一段DNA(標記DNA或疾病基因)在染色體的絕對位置 體細胞雜交(somatic cell hybridization) 過去常用的方法 人類細胞與老鼠細胞融合 解析度不高 原位雜交(in situ hybridization) 螢光原位雜交(FISH) 第十一页，共四十页。 原位雜交 將DNA片段用放射性元素製作成探針,與分裂中期的染色體雜交 由X光放射顯影可以看到結合的位置 解析度不佳,只達到2Mb-5Mb 只能用於分裂中期的染色體 第十二页，共四十页。 螢光原位雜交(FISH) FISH-fluorescent in situ hybridization 用螢光製作探針 與染色體雜交後在螢光顯微鏡下觀察 用於分裂間期的染色體 此時的染色體的構型比分裂中期較為伸長 最好的FISH可以做到5kb的解析度 第十三页，共四十页。 複製疾病基因 第十四页，共四十页。 複製疾病基因 估計疾病基因的大略位置→複製→決定核甘酸序列或表現蛋白 將此序列做為探針,從基因庫找出此基因,進而大量複製 方法 染色體步移(chromosome walking) 候選基因法(candidate gene approach) 第十五页，共四十页。 染色體步移 -Ⅰ 得知基因的核甘酸序列 用與疾病基因最接近的標記DNA做為探針從基因庫找出一個能夠與它雜交的DNA片段 此片段應包含標記DNA的序列 片段愈長,愈有可能包含所要的疾病基因 以λ噬菌體做為載體,長度約25Kb 若以YAC做為載體,長度可達2Mb 第十六页，共四十页。 染色體步移 -Ⅱ 若疾病基因與標記DNA的距離比載體攜帶的DNA片段還長,則標記DNA篩選出的DNA片段必定沒有包含疾病基因 利用染色體步移的方法,將找到的片段做為探針尋找與基因庫裡有重疊的DNA片段 重複多次後,應可以找到包含疾病基因的片段 第十七页，共四十页。 染色體步移 第十八页，共四十页。 確定疾病基因 確定經染色體步移所找到的DNA片段為確實的疾病基因 方法 基因表現 觀察其蛋白質產物的功能 突變篩選 疾病係由基因突變所引起，其基因序列必定與正常人有些差異 基因定序，最可靠的方法 第十九页，共四十页。 候選基因法 根據資訊,推測哪一種蛋白質或許與這種疾病有關 例如： Marfan syndrome是一種結締組織疾病,因此構成結締組織的蛋白質基因是最可能的「候選基因」 結腸癌相關的MSH2基因。結腸癌細胞的DNA複製錯誤頻率很高,與酵母菌的MSH2基因突變後的結果類似。因此MSH2可能是主要的疾病基因 第二十页，共四十页。 癌症 癌細胞,其特徵為不正常的分裂增生 許多參與細胞分裂的基因發生突變 最主要的是p53 約50-60%的癌細胞具有突變的p53 其次是,在細胞週期扮演萬能煞車的pRB 約在40 %的癌細胞發生突變 Ras 約25%的癌細胞含有它的突變體(mutant) 第二十一页，共四十页。 p53突變體百分比 第二十二页，共四十页。 第二十三页，共四十页。 病毒與癌症-Ⅰ R. Palmer Beasley, Clinical observation 1975年開始,追蹤22,707人,其中已受到B型肝炎病毒(HBV