基因工程概述.pptVIP

* 第三十一页，共五十七页。 第三十二页，共五十七页。 基因工程的一般步骤 获得目的基因（目的基因的获取） 制备重组DNA分子（基因表达载体的构建） 转化受体细胞(将目的基因导入受体细胞) （筛选出获得目的基因的受体细胞、培养重组细胞） 4. 目的基因的表达（目的基因的检测和鉴定） 第三十三页，共五十七页。 第一步：获取目的基因 方法： 将含有某种生物不同基因的许多DNA片段，导入受体菌的群体中储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库（gene library） 基因组文库 cDNA文库 1.从基因文库中获取目的基因。 第三十四页，共五十七页。 基因文库的构建模式图 通过对 受体菌的 培养而 储存基因 第三十五页，共五十七页。 第三十六页，共五十七页。 2.利用PCR技术扩增目的基因 PCR（polymerase chain reaction）:聚合酶链式反应.是以DNA变性、复制的某些特性为原理设计的.1988，K.Mulllis莫里斯发明。 前提条件是必须对目的基因有一定的了解，需要设计引物。 3.通过化学方法直接人工合成 高温变性 低温退火(复性) 中温延伸 第三十七页，共五十七页。 第三十八页，共五十七页。 第二步： 制备重组DNA分子（基因表达载体的构建） 核心 限制性核酸内切酶 需要哪两种工具？ DNA连接酶 第三十九页，共五十七页。 总结：表达载体需由哪几部分组成 复制原点 启动子 目的基因 终止子 标记基因 第四十页，共五十七页。 第一章基因工程 第一页，共五十七页。 第一节 基因工程概述 基因工程又称为重组DNA技术，指在体外通过人工“剪切”和“拼接”等方法，对生物的基因进行改造和重新组合，然后导入受体细胞并使重组基因在受体细胞中表达，产生人类需要的基因产物的技术。 基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，并通过体外DNA重组和转基因技术，赋予生物以新的遗传特性，从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。 第二页，共五十七页。 基因工程的别名 操作环境 操作对象 操作水平 基本过程 结果 实质 DNA重组技术 生物体外 基因 DNA分子（基因）水平 人类需要的基因产物 剪切 →拼接 →导入 →表达 基因重组 第三页，共五十七页。 基因工程的诞生和发展 第四页，共五十七页。 证明DNA是遗传物质 发现DNA双螺旋结构 破译遗传密码 限制性核酸内切酶的发现 DNA连接酶的发现 逆转录酶的发现 质粒等载体的发现 基因工程 的诞生 1944，艾弗里 1953，沃森和克里克 1963，尼伦贝格 1970，阿尔伯、内森斯、史密斯 第五页，共五十七页。 基因工程的诞生 1973年，美国科学家科恩（S.N.Cohen）等将两种不同来源的DNA分子进行体外重组,并首次实现了在大肠杆菌中的表达,创立了定向改造生物的新技术—基因工程。 第六页，共五十七页。 基因工程的工具—酶与载体 分子手术刀——限制性核酸内切酶。 分子针线（分子缝合针）— DNA连接酶。 基因的运输工具（分子运输车）—载体。 第七页，共五十七页。 限制性核酸内切酶 限制性内切酶是在生物体(主要是微生物)内的一种酶，能将外来的DNA切断，由于这种切割作用是在DNA分子内部进行的，故名限制性核酸内切酶。 即每种限制性内切酶只能识别特定的核苷酸序列，并在特定的位点上切割DNA分子。 特点： 特异性。 举例：EcoR1限制酶、Sma1限制酶 第八页，共五十七页。 限制性内切酶作用示意图 黏性末端 磷酸二酯键 第九页，共五十七页。 第十页，共五十七页。 不同的限制性核酸内切酶 知识海洋 平(口)末端 回文序列 第十一页，共五十七页。 第十二页，共五十七页。 要想获得某个特定性状的基因必须要用限制酶切几个切口？可产生几个黏性末端？ 要切两个切口，产生四个黏性末端。 如果把两种来源不同的DNA用同一种限制酶来切割，会怎样呢？ 会产生相同的黏性末端，然后让两者的黏性末端黏合起来，就似乎可以合成重组的DNA分子了。 第十三页，共五十七页。 A A T G A A T T C G A T G A T T C C G T A A T G A A T T C G A T T A C T T A A G C T A C T A A G G C A T T A C T T A A G G C 第十四页，共五十七页。 DNA连接酶（DNA ligase） 同一种 第十五页，共五十七页。 连接的部位： 用DNA连接酶连接两个相同的黏性未端要连接几个磷酸二酯键？ 磷酸二酯键