PCR反应原理的学习教案.pptxVIP

PCR反应原理的学习教案第1页/共16页 PCR反应原理和反应过程（一）PCR基本组成：模板DNA引物4种脱氧核糖核苷酸DNA聚合酶其他（Mg2+、化学物质等）（二）DNA的体外复制的步骤：1、变性（90℃-96℃）2、退火（25℃-65℃）3、延伸（70℃-75℃） 每一循环经过变性、退火和延伸，DNA含量即增加一倍。第2页/共15页第2页/共16页 １、变性（denaturation）双链DNA模板在热作用下，氢键断裂，形成单链DNA。第3页/共15页第3页/共16页 2、复性(renaturation)（退火，annealing）系统温度降低，引物与DNA模板结 合，形成局部双链。影响复性速度的因素： DNA浓度 DNA片段的大小 DNA片段复杂性 合适的复性温度 适当的离子强度第4页/共15页第4页/共16页 3、延伸（extension） 在Taq酶（在72℃左右，活性最佳）作用下，以dNTP为原料，从5′端→3′端延伸，合成与模板互补的DNA链。第5页/共15页第5页/共16页 常用的荧光定量PCR方法SYBR Green I Taqman水解探针第6页/共15页第6页/共16页 SYBR Green I结合到双链DNA的小沟部位只有与双链DNA结合后才发荧光SYBR 与dsDNA 结合，并且受到激发的时候，可以发