多酚氧化酶活性测定及控制[开题报告].pdfVIP

毕业论文开题报告 生物工程 多酚氧化酶活性测定及控制 一、选题的背景、意义 多酚氧化酶（PPO ）广泛存在于自然界，在果实和蔬菜收获后，PPO 所引起的反应常常 会使果肉发生褐变、产生异味和损失营养。 本研究就PPO 的活性和影响该酶作用的因素进行阐述，为果蔬贮藏和加工中酶促褐变 的防治提供思路。 二、相关研究的最新成果及动态 2.1鲜切莲藕组织中多酚氧化酶的分离纯化 从鲜切藕中粗提多酚氧化酶，并通过硫酸铵盐析沉淀，DEAE-SepH-Arose 离子交换柱 层析以及PHenyl SepHArose 6FAsT Flow 疏水柱层析进行纯化后，经SDS电泳确定为 单一条带，表明该酶已被纯化到电泳均一。在整个过程中，该酶纯化了95 ．66 倍，产率为 2 ．4 ％。同时研究表明，鲜切莲藕组织中PPO 相对分子质量在65 900～66 100 之间。 2.2 不同小麦多酚氧化酶活性检测方法的比较 以邻苯二酚和酪氨酸为底物所测PPO 活性极显著相关,邻苯二酚所测活性强,但酪氨酸所 测活性的变异系数大。面粉PPO 活性和面粉及面制品色泽的变化相关性最强,但籽粒和全麦 粉中的PPO 活性高,变异系数大。 2.3 PPO活性与小麦粉主要理化指标的关系 PPO 活性与小麦粉白度成极显著负相关性,与灰分含量成极显著正相关性;前路粉流PPO 活性比后路粉流低;物料含皮较多的在线粉流 PPO 活性高;物料来源于小麦胚乳外层的粉流 PPO 活性高。 2.4 核桃组织培养中外植体褐变多酚氧化酶活性的控制 在抑制PPO 活性方面,PVP 作用最明显,其次是NA2S2O3、AGNO3 。 2.5 石榴果皮中的多酚氧化酶(PPO)活性测定的最佳试验条件 以邻苯二酚为底物时,底物浓度宜大于20mmol/L,其最适波长为420nm,最适pH 值为6.8, 最适温度为50℃,反应时间不宜超过20min,反应完成后在20min 后测定 O 的活性最为稳 定。抑制剂NAHSO4 的有效抑制浓度为0.8mmol/L。 2.6 纯化的莲藕多酚氧化酶(PPO)与底物和抑制剂相互作用时的二级结构变化 园二色谱分析表明莲藕 O 主要含有α一螺旋和β一折叠结构。与抑制剂作用后，莲 藕 O 活性显著降低，同时伴随其二级结构中α-螺旋结构明显减少，表明莲藕 O 的活性 中心可能位于α-螺旋结构中。荧光分析表明，莲藕 O 与邻苯三酚(pyroGAllic Acid ，PA) 作用后，酪氨酸残基荧光强度略有降低， 位移不明显，色氨酸残基荧光强度略有降低， mAx mAx 红移2 nm；而与莲藕多酚(LoTus rooT polypHenol，LRP)作用后，莲藕 O 分子中酪 氨酸(Tyr)和色氨酸(Trp)残基荧光强度显著提高，且其最大发射波长分别蓝移 6nm 和红移 5nm 。当加入异Vc 钠后，Tyr 和Trp 残基最大发射峰显著红移，说明Trp 和防残基位于一定 的疏水环境对维持 O 催化活性的优势构象至关重要。 2.7 磁场和抑制剂对莲藕多酚氧化酶反应动力学的影响 以邻苯二酚为底物,莲藕 O 褐变反应动力学符合米氏方程所描述的单底物酶促反应动 力学,Km 为0.775mol/L,VmAx 为11.150U/min。Vc 对 O 有较强的抑制作用,反应动力学参 数Km 为0.081mol/L,VmAx 为3.243U/min,呈现反竞争性抑制,表现为褐变出现滞后,随Vc 浓 度的增大滞后时间逐渐增长,且呈现 S 型趋势,并建立了相应的反应方程。不同磁场强度下, 随着处理时间的变化, O 活性呈现波动性。3.17A/m 磁场强度下处理4H 的酶液其反应动力 学曲线表现为S 型,并建立了相应的反应方程。 2.8 南湖菱果中多酚氧化酶抑制剂对其活性的影响 南湖菱 O 催化反应的最适温度为30 0C ,最适pH 6.5 ,最佳吸收波长420 nm ,最大反应 速度VmAx=33.67 uniT/min，米氏常数K = 0.286 mol/L。在3 种抑