第八章克隆基因的表达.ppt

第八章克隆基因的表达;第八章 克隆基因的表达;遗传信息从DNA到蛋白质的传递过程---中心法则。 ;二、克隆基因的表达：;三、制约目的基因表达的因素：;四、在原核细胞内正确表达的基本条件：;3. 外源基因和表达载体连接后，必须形成正确的阅读框架;用原核生物作宿主;识别原核细胞的启动子，催化所有的RNA合成。;有意义链;4. 不含内含子，缺乏转录后的加工系统。;二、原核表达系统的注意事项;是DNA上的能与RNA聚合酶结合并能起始mRNA合成的序列。;consensus sequences;5’-TTGACA-3’;原核启动子共有序列的功能;（2）翻译的起始位点;AUG（91%） GUG（8%） UUG（1%）;全酶是一个5聚体，含有两个α小亚基，和2两个大亚基（β和β′），一个σ亚基。;3. 转录终止子;由于茎环3’段紧接一串A/U的配对，稳定性比较差，有利于转录物脱落而不利于转录延续。 ;5-CCCACAGCCGCCAGTTCCGCTGGCGGCATTTTAA CT TCT TTCT-3 3-GGGTGTCGGCGGTCAAGGCGACCGCCGTAAAATTGAAGAAAGA-5(模板);大肠杆菌偏爱UAAU。一般安置上全部的三个终止密码防止核糖体跳跃（skipping）。;① 必须是一种强启动子;来自大肠杆菌的乳糖操纵子。;;四聚体的阻遏物;阻遏物与DNA的结合;①乳糖操纵子