B-02-水体中大肠菌群测定资料.pptxVIP

【课前预习】;【目的要求】;【实验原理】; 发酵法： 又称多管发酵法或三步发酵法(此法是根据大肠菌群具有发酵乳糖产酸产气的特性，利用含乳糖的培养基培养不同稀释度的样品经初发酵、平板别离和复发酵3个检测步骤，最后根据结果查最大自然数〔most probable number〕表，算出食品中的大肠菌群数。 ) ;1) 初发酵〔推测试验〕： 将不同稀释度的水样，分别接种于含有乳糖等糖 类的培养液中〔3倍或1倍乳糖培养基，视所加的水样 体积和培养基体积而定〕，经37 oC培养24 h，观察产 酸产气情况，以初步判断是否有大肠菌群存在。; 发酵管内装有乳糖蛋白胨液体培养基，并倒置杜氏小套管。乳糖能起选择作用，因为很多细菌不能发酵乳糖，而大肠菌群能发酵乳糖而产酸产气。为便于观察细菌的产酸情况，培养基内加有溴甲酚紫作为pH指示剂，细菌产酸后，培养基即由原来的紫色变为黄色。溴甲酚紫还有抑制其他细菌如芽孢菌生长的作用。;2〕平皿别离〔证实试验〕;平板培养基使用伊红美蓝琼脂〔eosin methyleneblue agar，EMB agar〕。伊红美蓝琼脂平板含有伊红和美蓝染料，在此亦作为指示剂，大肠菌群发酵乳糖造成酸性环境时，该两种染料即结合成复合物，使大肠菌群产生带核心的、有金属光泽的深紫色〔龙胆紫的紫色〕阳性菌落。初发酵管24h内产酸产气和48h产酸产气的均需在以上