兰州大学《分子生物学》课件-第2章DNA的复制.pptVIP

生物为什么选择RNA做引物？ 2）大肠杆菌的复制起始 在oriC上DNA复制的起始模式 复制起始复合体 Hu-DnaA蛋白 解链酶六聚体 2）共价延伸 二、延伸： 1. 前导链合成 2. 后随链合成 3. RNA引物去除 4. 前体片段的连接 复制叉的三维结构 RNA引物的切除 由于没有一种连接酶能将DNA片断与RNA引物连接起来 ,所以须由pol I的5’→3’外切核酸酶活性来切除RNA引物,同时pol I以其5’→3’聚合酶活性将适当的脱氧核苷酸聚合上来 。 RNA引物通过PolI5’?3’外切酶活性或RNAaseH除去 前体片断的连接 DNA连接酶把DNA片段连接起来成为一条链。 后随链的合成 细菌复制叉上的蛋白 全酶 切除RNA引物 DNA聚合酶III（ Pol III ）： Pol III是大肠杆菌中最重要的复制酶，由十种亚基组成，?亚基决定了Pol III全酶的持续合成能力。 酶活性： 5’ 3’聚合活性 3’ 5’外切酶活性(校阅作用) 聚合酶解体前加上的的碱基 数 三种DNA多聚酶的比较 返回 ? 大缺口 ▂▂ ▂▂▂▂ ━━━→?? ▂▂ ▂▂▂▂ 　　　　　　　　　　　 ▔▔▔▔▔▔▔▔▔▔▔▔▔ 仅 pol I ▔▔▔▔▔▔▔▔▔▔▔▔▔▔ ? 小缺口? 　　　　　　　 pol Ⅲ或pol I ▔▔▔▔▔▔▔ ▔▔▔▔ ━━━━━→ ▔▔▔▔ ▔▔▔▔▔▔▔ 　 ▔▔▔▔▔▔▔▔▔▔▔▔▔ ▔▔▔▔▔▔▔▔▔▔▔▔▔ 　 其他功能：1. 缺口充填 pol Ⅲ和pol I缺口充填能力是大不相同的。pol Ⅲ只能充填几个碱基的小缺口,而pol I能充填很大的缺口,甚至能完成几乎整个互补链的复制。 2. 切口平移(Nick Translation)： 应用：同位素标记 切口平移移到哪为止 四、 DNA连接酶(DNA Ligase) DNA连接酶可以使切刻接合，即催化单链DNA切口上5’-P和3’-OH形成磷酸二酯键。 反应条件：只有当切刻的3‘-OH和5’-P相邻并且各自的碱基处于配对状态时,DNA连接酶才能起作用 。 分类：T4嗜菌体连接酶 （ ATP） 大肠杆菌连接酶 （ NADH） DNA Ligase 的作用 连接酶的应用：连接和粘性末端 平头末端： + 粘性末端 + 平头末端效率低，粘性末端效率高。 五、与DNA几何学性质相关的酶 1. 螺旋酶(helicases) 又称为解旋酶,是促进DNA的两条互补链分离的一类酶,细胞中含有多种螺旋酶。 dnaB基因的产物dnaB蛋白是一种解旋酶，通过ATP水解驱动dnaB蛋白在复制叉上移动使DNA解旋 2. DNA旋转酶(E.coli 拓扑异构酶Ⅱ图) DNA旋转酶有四个亚基,两个α-亚基和两个β-亚基。 螺旋酶(helicases) 单链结合蛋白 (Single-Strand Binding protein, SSB蛋白) ：使单链保持延伸状态,防止单链模板退火复性。 特点：具有协同作用（cooperativity）； 可以重复使用； 还参与DNA的修复和重组。 拓扑异构酶(Topoisomerase) 在复制过程中，由于解螺旋造成复制叉前方产生正超螺旋，造成阻止复制进行的压力，而拓扑异构酶可以利用酶切、连接的功能，将正超