基因诊断与基因治疗总结.pptxVIP

基因诊断与基因治疗总结;第 一 节 基 因 诊 断Gene Diagnosis;基因诊断; ;、基因诊断的主要对象和样品来源;二、基因诊断技术;基因诊断常用技术方法;β珠蛋白链基因第6位密码子发生突变 GAG——GTG Glu——Val;;Southern blot;（二）PCR技术; PCR-单链构象多态性 single strand conformation polymorphism( SSCP)分析 PCR-SSCP是在PCR技术基础上发展起来的一种简单、快速、经济的显示PCR反应产物中点突变的手段。 原理：PCR产物经变性后可以产生2条互补的单链，不同的单链构象不同，如果存在基因突变，哪怕是只要有一个碱基发生改变，单链的构象也发生变化; 通过聚丙烯酰胺凝胶电泳，正常与基因突变的DNA单链将在凝胶上显现出不同的带型，从而确定野生型和突变型。 优点：简单，较高的敏感性，可同时分析多个样本。 ;第13页/共52页;（三）基因测序;三、基因诊断的应用;疾病;未病先防，既病防变;基因检测的现状;疾病易感基因检测适合于…...;第 二 节 基 因 治 疗Gene Therapy;定义 早期是指用正常的基因整合入细胞基因组，以校正和置换致病基因的一种治疗方法。 ; 20世纪60年代 Edward Tatum提出基因水平上纠正缺陷基因的设想。以病毒为截体，体细胞为靶细胞的技术路线，从根本上解决遗传病的治疗问题。 1966年 美国国立实验室的Rogers发现，接触兔乳头状病毒的实验工作人员中相当部分的血精氨酸降低。推测病毒核酸进入细胞使精氨酸酶活性升高。 1973年 Rogers用shope兔乳头状瘤病毒感染一个患有精氨酸血症女孩的皮肤成纤维细胞，使细胞精氨酸酶活性上升，且可持续7个月。 1990年11月，美国NIH的Blease,Culver和Anderson进行了首例人体基因治疗临床试验。患ADA缺失症的4岁小女孩，利用反转录病毒将ADA基因转移到T淋巴细胞中，再回输。患者免疫力明显提高，取得了巨大成功。;基因治疗的三要素：(NIH提出） 合适的目的基因 发病机制在DNA水平上已经清楚 要转移的基因已经克隆分离，其表达产物有详尽的了解 合适的基因转移方式 合适的基因表达与调控 ;三、基因治疗的基本策略;（二）基因增补;（三）基因沉默或失活 ;反义RNA 定义：与mRNA或其它RNA互补的RNA分子。 由于核糖体不能翻译双链的RNA，所以反义RNA与mRNA特异性的互补结合即抑制了该mRNA的翻译，是原核生物基因表达调控的一种方式，在真核生物中也存在反义RNA。;特点 （l）安全性高，专一性强，效率高。反义RNA只作用于特异的mRNA分子，不改变所调节基因的结构。反义RNA分子无论怎样修饰，最终将在细胞内部被降解，不留“残渣” （2）设计和制备方便 （3）具有剂量调节效应 （4）在治疗RNA病毒感染性疾病时有更大的优势。能直接作用于一些RNA病毒，阻断RNA病毒的繁殖;（四）自杀基因治疗; 自杀基因的类型 胸苷激酶基因thymidine kinase(TK) 胞嘧啶脱氨酶基因cytosine deaminase(CD); 自杀基因的旁观者效应 “自杀基因”治疗不仅使转导了“自杀基因”的肿瘤细胞在用药后被杀死，而且与其相邻的未转导“自杀基因”的肿瘤细胞也被杀死。;（五）基因免疫治疗(基因疫苗);三、基因治疗的基本程序;（一）选择治疗基因;（二）基因载体的选择;（三）靶细胞的选择;（四）基因转移方法;间接体内疗法 目的基因转移到体外培养的靶细胞内高效表达，然后将靶细胞回输体内 直接体内疗法 将目的基因在体内直接转移到靶细胞 载体：需要有特异导向性和高转移效率;;（五）治疗基因表达的检测 ;（六）回输体内;腺苷脱氨酶(ADA, Adenosine Deaminase) )缺乏的严重联合免疫缺陷(SCID, severe combined immunodeficiency syndrome);治疗基本步骤:;基因治疗成功范例;肿瘤的细胞疗法;四、基因治疗的应用与展望;基因治疗展望;基因治疗展望;关于考试;成绩评定;谢谢！;谢谢观看！