仪器分析课件-分子发光分析法.pptVIP

课后习题： 1. P108页，2、3 、4 、5题 2. 具有哪些分子结构的物质有较高的荧光效率？ 影响荧光强度的因素及溶液荧光的猝灭（P93~95） 荧光强度与溶液浓度的关系(P93) 荧光分光光度计(P95) 分子荧光分析法的应用(P97) 1. 影响荧光强度的（环境）因素（P93） (1) 溶剂 一般溶剂效应 特殊溶剂效应 溶剂极性的影响 л л* , n л* 1. 影响荧光强度的（环境）因素 (2) 温度——低温下测定，提高灵敏度 温度升高 分子间碰撞增加 分子内能转化加速 荧光强度降低 温度下降 介质粘度增加 分子间碰撞减 少 荧光强度增强 （荧光效率降低） 1. 影响荧光强度的（环境）因素 (3) pH值的影响 当荧光物质本身是弱酸或弱碱时，溶液pH值对该物质荧光强度有较大影响。 pH≈1有荧光 pH≈13无荧光 例：苯酚 离子化后，荧光消失 每一种荧光物质都有它最适宜的发射荧光的存在形式，也就是有它最适宜的pH范围。 1. 影响荧光强度的（环境）因素 (4) 内滤光作用和自吸收现象 内滤光作用：溶液中若存在能吸收激发光或荧光体所发射荧光的物质，会使荧光减弱的现象。 自吸收现象：荧光物质的荧光发射光谱短波长一端与该物质的激发光谱的长波长一端有重叠，在溶液浓度较大时，一部分荧光被自身吸收。 F λ 1. 影响荧光强度的（环境）因素 散射光：当一束平行光投射在液体样品上，一部分被吸收，一部分光线透过溶液，其中还有小部分由于光子和物质分子碰撞，使光子运动方向发生改变而向不同角度散射，这种光称散射光( scattering light )。 (5) 散射光的影响：应注意Raman光的干扰 散射光的影响 瑞利散射光（Rayleigh Scattering light）： 光子和物质分子碰撞时，未发生能量的 交换，仅光子运动方向发生改变。 拉曼散射光（Raman Scattering light）： 在光子运动方向发生改变的同时，光子 将部分能量转给物质分子，或从物质分 子得到能量，物质分子的能量会发生改变。 散射光的影响 拉曼散射光的波长接近荧光波长，在测定时，荧光光谱会与这一散射光有部分重叠，干扰较大。可通过选用适当激发光波长的方法予以消除。 2. 溶液荧光的猝灭（熄灭） (P95) 荧光猝灭剂的影响 荧光猝灭：指荧光物质分子与溶剂分子或其他溶质分子相互作用引起荧光强度降低的现象。 引起荧光猝灭的物质称荧光猝灭剂 常见荧光猝灭类型 （1）碰撞猝灭：猝灭剂分子与处于激发态的荧光物质分子碰撞而损失能量。 （2）静态猝灭：部分荧光分子与熄灭剂分子作用生成了非荧光的配合物。 （3）转入三重态的猝灭：在荧光物质分子中有溶解氧的存在或引入溴或碘后，易发生体系跨越而转变成三重态。 常见荧光猝灭类型 （4）荧光物质的自猝灭：单重激发态分子和未激发的荧光物质分子碰撞引起自猝灭。荧光物质浓度超过 1g/L 时，会产生自身猝灭。 注意：荧光猝灭剂在荧光分析中会产生测定误差。但是，如果一个荧光物质在加入某种猝灭剂后，荧光强度的减弱和荧光猝灭剂的浓度呈线性关系，可利用这一性质测荧光猝灭剂的含量 荧光猝灭法。 3.荧光强度与溶液浓度的关系（P93） If = Φf Ia （1） I0 It If Ia c , l 3.荧光强度与溶液浓度的关系 If =φf ? Ia ，Ia = I0 - It It / I0 = 10-A = 10-εlc It = I0· 10-εlc Ia = I0 - I0· 10-εlc = I0（1- 10-εlc ） 3.荧光强度与溶液浓度的关系 Ia = I0（1- 10-εlc ）= I0（1 - e - 2.303εlc ） e - 2.303εlc = 1 - 2.303εlc，（εl c≤0.05） Ia = I0 · 2.303εl c If =φf ? Ia 3.荧光强度与溶液浓度的关系 ∴ If =φf ?Ia = 2.303?φf? I0?εl c 当φf、I0、ε、l 固定不变时，If 与c成正比 ∴ If = K ?c （εl c≤0.05）（2） 4. 定量分析方法 标准曲线法 定量分析依据： If = K ?c 以荧光强度为纵坐标，标