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生物细胞健康检测第1页/共58页 内容ADME检测细胞凋亡细胞活力检测细胞毒性检测谷胱甘肽测定线粒体功能检测第2页/共58页 ADME:毒药物动力学第3页/共58页 对外源化学物ADME过程的研究意义可用来确定与毒性发生有关的靶器官或组织的暴露特征。 可为在其他的毒性研究的剂量选择提供有用数据。 有助于阐明两种或两种以上外源化学物联合毒作用的机制。 可通过改变外源化学物ADME过程，以预防和治疗外源化学物中毒。 第4页/共58页 代谢（转化）类型 可分两类:第一类包括氧化、还原及水解过程；第二类为结合过程，第一类转化产物再经与体内某些代谢物结合，产物一般水溶性加大，利于排泄。 　　（1）第一阶段反应（第一类型）：氧化、还原及水解等。氧化，如醇氧化、醛氧化、单胺氧化、氧化脱氢及N-氧化等；还原，如硝基还原成氨基（-NH2）。 　　（2）第二阶段反应（第二类型）：即结合反应，使药失效，随尿排出。含羟基、羧基、胺基的化合物与葡萄糖醛酸结合成酯、醚、酰胺化合物；硫酸可与酚类药物及酚性类固醇结合成硫酸酯；N-甲转移酶使伯胺、肿胺及叔胺甲基化，以S-腺苷甲硫氨酸作为甲基供应体；磺胺类及芳香族氨基等在乙酰辅酶A参与下乙酰化。 第5页/共58页 ADME Metabolism产品P450-Glo? Assays Screening SystemsGSH-Glo Assay UGT-Glo? Assays Screening SystemsMAO-Glo? Assay Pgp-Glo? Assay System 第6页/共58页 第7页/共58页 第8页/共58页 第9页/共58页 UGT活性检测哺乳类动物最重要的结合反应 药物结构中的功能基团结合生成葡萄糖醛酸GA的结合物 UDPGA（尿核苷二磷酸葡萄糖醛酸）：GA的活性供体第10页/共58页 第11页/共58页 Pgp-Glo? Assay SystemsPgp, 也被称为MDR1 和ABCB1, 是一种 170kDa 的完整的质膜蛋白，其生物学功能为依赖ATP 的药物泵，在多药抗药性和某些不良药物相互作用中发挥重要作用。 Pgp-Glo? 试剂盒检测化合物对膜制备物中重组人类Pgp 活性的影响。该试剂盒建立在依赖于ATP 的萤火虫萤光素酶反应上，该反应可产生光信号。ATP 先与Pgp 共同孵育，然后Pgp ATP 酶反应被终止, 未被消耗的 ATP 由萤光素产生的发光信号而被检测出来。Pgp依赖的发光信号的降低反映了Pgp 对ATP 的消耗，因此信号减少得越多，Pgp 的活力就越高。相应地，若待测样品中含有可刺激Pgp ATP 酶的化合物，这个反应产生的发光信号会显著低于未经处理的对照组。第12页/共58页 细胞凋亡（apoptosis /(programmed cell death,PCD) 细胞凋亡是指为维持内环境稳定，由基因控制的细胞自主的有序的死亡。细胞凋亡与细胞坏死不同，细胞凋亡不是一件被动的过程，而是主动过程，它涉及一系列基因的激活、表达以及调控等的作用，它并不是病理条件下，自体损伤的一种现象，而是为更好地适应生存环境而主动争取的一种死亡过程。 第13页/共58页 Pre-Caspase 3 ToolsApaf-1Cyt ccaspase8caspase3caspase9protein cleavage(e.g., PARP)DNA CleavageFas/TNFReceptorFADDstaurosporineantitumoragentsCaspase-Glo 2Caspase-Glo 8Z-VAD-FMKXXCaspase-Glo 9Caspase-Glo 6第14页/共58页 Caspase-3 ToolsApaf-1Cyt ccaspase8caspase3caspase9DNA CleavageFas/TNFReceptorFADDstaurosporineantitumoragentsCaspase-Glo 3/7Apo-One Caspase-3/7CaspACE FluorimetricCaspACE ColorimetricFITC-VAD-FMKAnti-ACTIVE Caspase-3 pAbAc-DEVD-CHOinhibitorprotein cleavage(e.g., PARP)X第15页/共58页 Post Caspase-3 Toolscaspase3DNA CleavageFas/TNFReceptorFADDstaurosporineantitumoragentsprotein cleavage(e.g., PARP)Apaf-1Cyt ccaspase8casp