农业农村部公告第282号-2-2020CN.docx

ICS 65.120 B 46 中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准 农业农村部公告第282号一2—2020 饲料中土霉素、四环素、金霉素、 多西环素的测定 Determination of oxytetracycline, tetracycline, chlortetracycline, doxycycline in feeds 2020-03-20 发布 2020-07-01实施 中华人民共和国农业农村部发布 I 农业农村部公告第282号—2—2020 前 言 本标准按照GB/T1.1—2009 给出的规则起草。 本标准由农业农村部畜牧兽医局提出。 本标准由全国饲料工业标准化技术委员会(SAC/TC 76)归口。 本标准起草单位：河南省兽药饲料监察所。 本标准主要起草人：吴宁鹏、李慧素、彭丽、李灵平、刘占通、杜红鸽、方忠意、刘凤美、张磊、于辉、班曼 曼、陈少渠。 农业农村部公告第282号—2—2020 饲料中土霉素、四环素、金霉素、多西环素的测定 1 范围 本标准规定了饲料中土霉素、四环素、金霉素、多西环素测定的高效液相色谱法和液相色谱-串联质谱 法，液相色谱-串联质谱法为确证方法。 本标准适用于配合饲料、浓缩饲料、添加剂预混合饲料和精料补充料中土霉素、四环素、金霉素、多西 环素的测定。 本标准高效液相色谱法在配合饲料中的检测限为3 mg/kg, 定量限为5 mg/kg; 在添加剂预混合饲 料、浓缩饲料和精料补充料中检测限为10mg/kg, 定量限为20 mg/kg。 液相色谱-串联质谱法在配合饲 料中的检测限为0.01 mg/kg, 定量限为0.05 mg/kg; 在添加剂预混合饲料、浓缩饲料和精料补充料中的 检测限0.025 mg/kg, 定量限为0. 1mg/kg。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 14699.1 饲料 采样 GB/T 20195 动物饲料 试样的制备 3 样品 按 GB/T 14699.1抽取有代表性的饲料样品，用四分法缩减取约200g,按照GB/T 20195 制备样品 粉碎后过0.45 mm 孔径的分析筛，混匀，装入磨口瓶中，备用。 4 高效液相色谱法(HPLC) 4.1 原理 用 EDTA-Mcllvaine 缓冲溶液提取样品中的土霉素、四环素、金霉素、多西环素，高效液相色谱法-荧 光法测定，外标法定量。 4.2 试剂或材料 除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和符合GB/T 6682规定的二级水。 4.2.1 盐酸土霉素、盐酸四环素、盐酸金霉素、多西环素标准品，含量均≥93.0%。 4.2.2 甲醇：色谱纯。 4.2.3 枸橼酸溶液(0.1 mol/L): 称取枸橼酸(C?H?O? ·H?O)21.01g, 用水溶解并稀释至1000mL。 4.2.4 磷酸氢二钠溶液(0.2 mol/L): 称取磷酸氢二钠(Na?HPO? · 12H?O)71.63 g,用水溶解并稀释至 1000 mL。 4.2.5 盐酸溶液(1mol/L): 移取盐酸9mL, 用水稀释至100 mL。 4.2.6 氢氧化钠溶液(1 mol/L): 称取氢氧化钠4g, 用水溶解并稀释至100mL。 4.2.7 Mcllvaine 缓冲溶液(pH4.0): 取0.1 mol/L 枸橼酸溶液(4.2.3)1000 mL 、0.2 mol/L 磷酸氢二 钠溶液(4.2.4)625 mL, 混匀，用盐酸溶液(4.2.5)或氢氧化钠溶液(4.2.6)调pH 至4.0±0.05。 4.2.8 EDTA-Mcllvaine 缓冲溶液：取乙二胺四乙酸二钠(C?H?N?O?Na? ·2H?O)60.5 g,加 Mcllvaine 缓冲溶液(4.2.7)1625 mL, 溶解，混匀。 4.2.9 EDTA-CaCl?- 乙酸盐缓冲液：取乙二胺四乙酸二钠(Ci?H?N?O?Na? ·2H?O)9.3g, 加水500 2 农业农村部公告第282号—2—2020 mL, 溶解，加氢氧化钠4.0 g,溶解，冷至室温，再依次加无水氯化钙5.5 g、乙酸5 . 7 mL, 混匀，加水至 1000mL, 用盐酸溶液(4.2.5)或氢氧化钠溶液(4.2.6)调pH 至6.6±0.1。 4.2.10标准储备液(10mg/mL):