NY_T 3871-2021CN 大蒜中蒜氨酸的测定 高效液相色谱法.docx

ICS 67.080.20 CCS B 31 NY 中 华 人 民 共 和 国 农 业 行 业 标 准 NY/T 3871—2021 大蒜中蒜氨酸的测定 高效液相色谱法 Determination of alliin in garlic— High performance liquid chromatography 2021-05-07 发布 2021-11-01 实施 中华人民共和国农业农村部发布 NY/T 3871—2021 前 言 本文件按照GB/T1.1-2020 《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由农业农村部种植业管理司提出并归口。 本文件起草单位：河南省农业科学院农业质量标准与检测技术研究所、农业农村部农产品质量监督检 验测试中心(郑州)。 本文件主要起草人：郝学飞、胡京枝、赵光华、王建、曹颖妮、余大杰、张军锋、魏振亚、钟红舰、裴金花。 1 NY/T 3871—2021 大蒜中蒜氨酸的测定 高效液相色谱法 1 范围 本文件规定了大蒜中蒜氨酸含量的高效液相色谱测定方法。 本文件适用于大蒜中蒜氨酸含量的测定。 本文件的检出限为0.012 g/kg,定量限为0.040 g/kg。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本 文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 原理 大蒜中蒜氨酸在紫外光区214nm 波长处有最大吸收，经灭酶、磷酸溶液提取、HPLC 分离后，紫外检 测器测定，外标法定量。 4 试剂或材料 除非另有规定，本文件所用试剂均为分析纯。水为GB/T 6682 规定的一级水。 4.1 试剂 4.1.1 甲 醇(CH?OH): 色谱纯。 4.1.2 磷酸(H?PO?): 优级纯。 4.2 溶液配制 磷酸溶液(0.01%,体积分数):准确吸取0.100mL 磷酸(4.1.2)于预先加入一定量水的1000mL 容 量瓶，稀释至刻度，经0.22 μm 水相滤膜过滤。 4.3 标准品 蒜氨酸标准品(Allin,C?H??NO?S,CAS 号：556-27-4):含量≥98%。 4.4 标准溶液配制 蒜氨酸标准储备液(500 mg/L): 称取蒜氨酸标准品(4.3)5 mg (精确至0.01mg) 于10mL 容量瓶中， 加水适量使溶解并稀释至刻度，摇匀，4℃保存，有效期为1个月。 5 仪器设备 5.1 高效液相色谱仪：配有紫外或二极管阵列检测器。 5.2分析天平：感量0.01g、0.001g和0.01 mg。 5.3 组织捣碎机。 5.4微波炉：功率900 W。 5.5 超声波清洗器. 5.6 离心机：转速10000 r/min。 6 样品 取有代表性的大蒜样品可食部分，混匀缩分至约50g(精确至0.01g),置于250 mL 烧杯中，微波功 2 NY/T 3871—2021 率900W 高火灭酶1 min. 冷却至室温，用水补充微波灭酶过程中损失的质量，再按缩分后样品质量(约50 g) 比1:1加水，用组织捣碎机粉碎制成蒜泥，作为试样。试样置于密闭容器内， -20℃冷冻保存。 7 试验步骤 7.1 试样处理 平行做两份试验。称取试样2 g (精确至0.001 g) 于100 mL 三角瓶中，加入60 mL 磷酸溶液(4.2), 手动振荡1 min 后超声提取15 min, 静置至恢复室温，用磷酸溶液(4.2)转移至100mL, 容量瓶中并定容， 取10mL 溶液于10 mL 离心管中，10000 r/min 离心15 min,上清液过0.22μm 水相滤膜，待测。 7.2 色谱参考条件 耐水液相色谱柱：Cig,250mm×4.6m,5μm · 或相当者： 流动相：磷酸溶液(4.2); 流速：0.8 mL/min; 进样量：10μL; 柱温：30℃; 检测波长：214 nm。 7.3 标准曲线的制作 准确吸取一定量的蒜氨酸标准储备液(4.4),用水配制成浓度约为10 mg/L 、20 mg/L 、50 mg/L、 100 mg/L 、250 mg/L的系列标准溶液：供高效液相色谱仪测定。 7.4 测定 取待测液(7.1)和相应浓度的标准溶液(7.3)按照7.2色谱参考条件测定，作单点校准或多点校准，以 保留时间定性，以色谱峰面积外标法定量。待测液和标准工作溶液中蒜氨酸的响应值应在仪器检测的线 性范围内。在上述色谱条件下，蒜氨酸标准溶液的色谱图见附录A