细胞培养的设备和操作技术.pptxVIP

细胞培养的设备和操作技术第1页/共84页第2页/共84页第一部分实验室的设计第3页/共84页 细胞工程实验室它必须满足三个基本的需要，即： ?实验准备（培养基配制，洗涤与灭菌）； ?无菌操作； ?控制培养。第4页/共84页实验室设计从总体上来分，实验室主要分为两类： ?基本实验室： ?辅助实验室：第5页/共84页1、基本实验室： ?准备室 ?接种室 ?培养室第6页/共84页准备室? 作用 植物细胞和组织培养所需器具的洗涤、干燥和保存；培养基的配制、分装和灭菌；化学试剂的配制；重蒸馏水的生产等。? 设计要求 面积20m2左右。通风透光，地面防滑，墙面防潮。第7页/共84页? 设 备▲ 实验台架▲ 大、小水槽▲ 烘箱▲ 冰箱▲ 天平系列▲ pH计▲ 高压消毒锅▲ 各种玻璃器皿▲ 药品柜▲（磁力）搅拌器▲ 电炉▲ 蒸馏水器第8页/共84页其中：玻璃器皿包括三角瓶、试管、培养瓶、培养皿、烧杯、量筒、移液管等移液枪（根据条件需要）由枪和枪头组成其他：锅、微波炉等第9页/共84页磁力搅拌器第10页/共84页电子天平万分之一百分之一第11页/共84页pH计第12页/共84页微量移液器蒸馏水器第13页/共84页接种室 ——也叫无菌操作室无菌操作室并非无菌，但应该保持清洁? 作用 供外植体的接种，培养物的转移和原生质体的游离培养操作之用。第14页/共84页? 设计要求 墙壁光滑平整，地面平坦无缝，除出入口和通气口外，应当密闭，空气不能对流，或者空气经净化后进入室内。 无菌室旁边应设有缓冲间，缓冲间内应有紫外灯，随时可进行灭菌。第15页/共84页无菌室内的日常灭菌：定期用甲醛和高锰酸钾混合后熏蒸，产生大量蒸汽，杀灭微生物。使用前处理：用新洁尔灭（1：50）擦净，然后用紫外灯照射灭菌至少20分钟，操作前用70%酒精喷雾。思考：紫外灯如何杀菌？操作中要注意什么？第16页/共84页? 设 备△ 紫外光灯△ 空调△ 放物架（或医用小平车：推送、放置培养基用；）△无菌操作用的器具：酒精灯、70%酒精消毒棉、解剖刀、弓背镊子、解剖针、剪刀等。第17页/共84页△ 超净工作台： 内设紫外灯、吹风装置、过滤装置等 每次实验前要用紫外灯灭菌20分钟以上，然后喷酒精灭菌，工作过程中注意一直开着吹风机，并且一定要关掉紫外灯，过滤网应经常清洗。第18页/共84页其它部件：△离心机：分离原生质体用；△点融合仪：细胞融合用。第19页/共84页? 作用 离体组织和试管苗生长发育的场所，应为培养物创造适宜的温、光、气等条件。? 设计要求 培养室内要求内壁保温、光滑、室顶高2.6m左右，易于控制温、湿度，窗上要求装双层密封玻璃窗，室内有足够电源。 第20页/共84页? 设 备△ 空调机：冷暖型△ 加热器△ 定时装置：控制光照时间△ 培养架：放置培养瓶△ 摇床和转床：悬浮培养△ 各种光质灯管：光照培养△ 温度计：控制温度△ 遮光帘：供暗培养之用第21页/共84页2、辅助实验室： ?细胞学实验室 ?摄影室及暗室 ?生化分析室第22页/共84页细胞学实验室? 作 用 植物组织和细胞培养过程中，需随时观察记录其细胞学和形态解剖学的变化，故要设置细胞显微观察室。? 主要设备 各种显微镜，显微照相设备，切片、制片仪器设备，染色用具，暗房设备等。第23页/共84页细胞工程实验室基本设备配制小结?基本设备：冰箱、天平、酸度计?灭菌设备：蒸汽压力灭菌锅、干热消毒柜、过滤灭菌装置、喷雾消毒器、紫外灯。?无菌操作设备：净化工作台、接种箱第24页/共84页? 光温控制设备：时间程序控制器、空调及温度感应器。? 细胞培养设备：培养设备根据需要而定，包括培养架、培养箱、摇床、生物反应器等。? 细胞学鉴定设备：光学研究显微镜、实体显微镜、倒置显微镜第25页/共84页第二部分基本操作技术 基本操作技术主要是围绕无菌操作技术展开的一系列操作技能，内容主要包括： 一．洗涤技术 二．灭菌、消毒技术 三、接种技术第26页/共84页一、 洗涤技术?、洗涤目的：去除杂物，降低带菌量?、根据洗涤对象的不同，主要分为：器皿洗涤（包括玻璃、塑料、搪瓷、 不锈钢器皿）培养材料洗涤第27页/共84页（一）器皿洗涤根据洗涤对象的具体情况可分为以下三种：常规洗涤微生物大量污染的洗涤特殊洗涤第28页/共84页? 常规洗涤△ 自来水洗去油渍、霉菌等脏物；△ 温肥皂水中浸泡一定时间后用刷子刷净；△自来水冲洗干净，至瓶壁不挂水珠为止；△ 蒸馏水淋洗内外壁△ 将玻璃器皿倒置：晾干或烘干（50～75℃）△ 放入除尘柜中备用第29页/共84页? 微生物大量污染的洗涤 △ 微生物污染器皿加压灭菌后再洗涤特殊洗涤（如沾有蛋白质类物质或其它有机物时)△ 经过常规洗涤未过蒸馏水的器具，浸泡入洗液（铬酸洗涤液是用重铬酸钾(K2Cr2