免疫学技术(第九讲).pptVIP

免疫学技术：利用抗原、抗体特异性反应的原理建立的各种检测与分析技术，以及建立在这些技术之上的各种制备方法。一般将涉及到抗原、抗体、免疫细胞、细胞因子等相关技术都称为免疫技术。 当前第1页\共有32页\编于星期五\2点 分类 1、免疫血清学技术 2、细胞免疫技术 3、免疫制备技术 4、分子免疫学技术 当前第2页\共有32页\编于星期五\2点 免疫学技术的应用 1、疾病诊断。 2、生物活性物质的超微定量。 3、物种鉴定（血清型、亚型分析等）。 4、微生物检测。 5、开发研制免疫增强药物、饲料添加剂、 疫苗等。 6、分子生物学领域。 当前第3页\共有32页\编于星期五\2点 主要内容 一 免疫血清学技术 二 主要血清学技术 三 细胞免疫技术 四 主要细胞免疫技术　　 专题一：免疫血清学技术 当前第4页\共有32页\编于星期五\2点 一、免疫血清学技术 1、血清学技术：简单地说指体外的抗原与抗体反应，由于抗体多来自于血清故称血清学。 2、分类： （1）凝聚性反应：凝集反应；沉淀反应 （2）标记抗体技术：荧光抗体，本酶标抗体， 　　　　放射性标记抗体 （3）补体参与的反应：补体结合反应； （4）中和反应：病毒中和试验 （5）免疫转印：Westen Blotting 当前第5页\共有32页\编于星期五\2点 一、免疫血清学技术 3、特点： （1）特异性和交叉性 　　　如猪瘟病毒抗体只能与猪瘟病毒结合，说明具有特异性；牛痘病毒来预防人的天花和猪瘟疫苗预防牛的病毒性腹泻病的例子说明具有交叉性。 当前第6页\共有32页\编于星期五\2点 一、免疫血清学技术 3、特点： （2）最适比和带现象 　　　带现象指因抗原或抗体过多而出现的抑制可见反应的现象，抗体过多易出现前带反应；抗原过多易出现后带现象。 当前第7页\共有32页\编于星期五\2点 一、免疫血清学技术 3、特点： （3）反应的两阶段性 　　　第一阶段为抗原与抗体的特异性结合，反应快，几秒钟至几分钟；第二阶段为抗原与抗体的可见现象阶段。 当前第8页\共有32页\编于星期五\2点 一、免疫血清学技术 3、特点： （4）反应的可逆性 　　抗原与抗以弱的非共价键结合，受物理化学热力学法则制约。在0-40度内，PH4-9范围易结合；如果温度超过60度或PH降至3度以下，抗原抗体复合物又可重新解离。 当前第9页\共有32页\编于星期五\2点 一、免疫血清学技术 3、特点： （5）反应的敏感性 　　　可用于定性，还可以检测极微量的抗原或抗体，其灵敏度大超过了常规的化学方法。 当前第10页\共有32页\编于星期五\2点 一、免疫血清学技术 4、影响血清学反应的因素 电解质：一般用NaCl作稀释液；标记抗体常用PBS磷酸盐缓冲溶液。 温度：一般较高温度可增加抗原与抗接触的机会，超过60度易解离。 酸碱度：PH6-8较合适。 当前第11页\共有32页\编于星期五\2点 二、主要血清学技术 （一）凝集反应 1、概念：颗粒性抗原（如细菌、红细胞）与相应抗体，在电解质存在下，发生凝集的反应。 2、分类：直接凝集反应、间接凝集反应、反向间接凝集反应、协同凝集反应等。 3、用途：如血型鉴定、牛布病检测、鸡白痢诊断等。 当前第12页\共有32页\编于星期五\2点 当前第13页\共有32页\编于星期五\2点 二、主要血清学技术 （二）沉淀反应 1、概念：可溶性抗原（细菌外毒素、内毒素，菌体、裂解液、血清、组织浸出液）与相应抗体，在电解质存在下，发生凝集的反应。 2、分类：单向琼脂扩散、双向琼脂扩散、对流免疫电泳、火箭电泳等。 3、用途：如炭疽、小鹅瘟诊断等。 当前第14页\共有32页\编于星期五\2点 Ascoli Ag Ab 对流免疫电泳 当前第15页\共有32页\编于星期五\2点 当前第16页\共有32页\编于星期五\2点 二、主要血清学技术 （三）免疫标记技术 1、概述：抗原与抗体能特异性结合，但抗体抗原分子小，含量低时，形成的复合物是不可见的。如果将超微量的物质标记（荧光素、酶、放射性同位素）就可检测出微量的抗原与抗体复合物，其特异性与敏感性远远超过常规血清学方法，被广泛用于病原微生物鉴定，传染病诊断及基因表达产物分析等。 当前第17页\共有32页\编于星期五\2点 二、主要血清学技术 （三）免疫标记技术 2、分类： （1）免疫荧光技术 （2）免疫酶技术 （3）放射免疫测定法 （4）免疫印迹法 （5） 免疫金标技术 （6） 免疫PCR 当前第18页\共有32页\编于星期五\2点 当前第19页\共有32页\编于星期五\2点 小鼠脾脏免疫荧光图像 当前第20页\共有32页