疾病与健康分子生物学演示文稿.pptVIP

3.5kb和2.1kb转录物由L链而来，2.4kb和0.8kb转录物由S链转录。3.5kb mRNA编码核心蛋白，其3’末端与2.1kb mRNA的3’末端相同，比HBV基因组L链的全长还多200bp以上，推测它的末端部分可能来自共价闭合的双链区。 当前第127页\共有189页\编于星期五\10点 2.4kb mRNA编码S蛋白，2.1kb mRNA编码原S1和S2蛋白，而0.8kb mRNA编码X蛋白。上述4种转录产物在病毒感染的细胞中相对含量有明显差异，其中3.5kb和2.1kb mRNA的转录量远远高于2.4kb和0.8kb mRNA。 当前第128页\共有189页\编于星期五\10点 3、HBV基因转录的调控 （1）顺式作用元件。HBV的4种转录产物虽然有不同的5’末端，但都利用同一终止信号和多聚(A)位点。 C启动子调控3.5kb mRNA的转录起始，在1705-1805位核苷酸处。其下游还发现一个有启动子功能的区域，不同的3.5kb mRNA可由不同的启动子控制。启动子上存在类似TATA的序列。 当前第129页\共有189页\编于星期五\10点 SP1启动子位于-89～－77核苷酸处，调控2.4kb mRNA的转录起始。含有典型的TATA序列以及与该序列相距45个碱基的肝细胞特异性转录因子HNF1结合位点。 HNF1的结合是SP1启动子在分化的肝癌细胞株中高水平转录的必要条件。 当前第130页\共有189页\编于星期五\10点 SP2启动子调控2.1kb mRNA的转录起始，在转录起点上游200个核苷酸内，有A-G 7个区，通过结合特异性调控蛋白影响转录水平。 A-C区在最远端（-168～－68位），若同时缺失，2.1kb mRNA转录下降到30%以下。D区位于-69～-49处，是必需元件。 近端的E-G个区位于转录起始位点上游45个核苷酸内。 当前第131页\共有189页\编于星期五\10点 F为负调控区，E区能抑制F区的负调控作用并与G区功能互补。B-F 4个区可与相同或相似的转录因子结合，若将外源表达的转录因子SP1与病毒DNA进行共转染，可起始HBV基因转录。有实验发现，纯化的SP1可以直接与B、D和F区结合。 X启动子位于-24～-124核苷酸处，调控0.8kb mRNA转录过程。 当前第132页\共有189页\编于星期五\10点 （2）增强子。HBV DNA中存在两个激活HBV启动子转录的增强子区域。增强子I位于表面抗原基因的3’端，X基因的5’端，与X启动子相重叠。该增强子在肝细胞中对启动子的增强活性是非肝细胞的10-20倍，暗示它具有细胞特异性。可能是HBV病毒嗜肝性的基础。 当前第133页\共有189页\编于星期五\10点 b. 寄主细胞因子协同作用的影响。 在不同细胞内，Tat的活性可有上千倍的差异。Tat与TBPI结合形成复合体而发挥作用，说明Tat与TAR对HIV复制的调控还需寄主细胞编码蛋白的协同作用。 当前第95页\共有189页\编于星期五\10点 c. 对上游启动子和增强子的依赖。 Tat-TAR功能的发挥依赖于其上游的启动子及增强子，当TAR远离上游启动子时，活性迅速下降。增强子SP1序列在Tat诱导细胞中对HIV转录的促进作用大于非激活细胞。 NF-кB序列对两种细胞的作用正好与SP1相反。TATA启动子序列的改变对未激活细胞影响很小，却可降低HIV在Tat诱导细胞中的复制。 当前第96页\共有189页\编于星期五\10点 （3）Rev蛋白。rev基因由两个外显子组成，分别编码25个氨基酸和91个氨基酸的两个肽段，最终组装成有116个氨基酸、相对分子质量为1.9×104的调控结构蛋白表达活性的Rev蛋白，是一个重要的反式激活因子，调控RNA剪切和运输，与RRE结合增加env的翻译。对HIV的许多调控蛋白编码基因有负调控作用，对其结构蛋白基因有正调控作用。 当前第97页\共有189页\编于星期五\10点 图9-18 Rev蛋白的结构示意图 当前第98页\共有189页\编于星期五\10点 Rev蛋白通过与env和gag/pol mRNA上的一段234个核苷酸的Rev效应元件实现其功能，具有HIVI特异性。 能增加含有Rev效应原件RNA的稳定性，促进它们向细胞质运转，并通过阻碍剪接子的组装抑制RNA的编辑，增加这些mRNA的翻译，促进HIV基因表达由早期（转录调控蛋白mRNA）向晚期（转录HIV结构蛋白mRNA）的转变。 当前第99页\共有189页\编于星期五\10点 Rev蛋白和RRE（Rev Response Element）的结合是通过Rev蛋白中富含碱性氨基酸的一段14肽（EGTRQARNRRRRWR）与RRE二级结构IIB茎区特异性结合实现的。Rev是核蛋