MALDI-TOFMS病原体鉴定质量保证专家共识.docx

MALDI— TOF MS 病原体鉴定质量保证 专家共识 基质关心激光解吸电离飞行时间质谱(matrix assisted laser desorptio n ioni zati on time — of — flight mass spectrometry, MALDI — TOF MS)作为一种兴的软电离质谱技术，由于其具有快速、准确、灵敏、 自动化及高通量等检测特点，已成为一项革命性病原体快速鉴定技术被用 于临床微生物试验室，并将逐步取代常规病原体生化鉴定方法。任何兴 技术应用于临床都需要建立标准的质量保证体系，以确保检测质量。本专 家共识将对开展 MALDI— TOF MS 用于病原体鉴定的设施与安全要求、人员 培训与力量评估、MALDI- TOFMS 病原体鉴定过程的质量掌握、检验程序性 能验证等进展建议。 设施与安全要求 ?风险评估： 拟开展 MALDI— TOF MS 病原体检测的试验室需在风险评估根底上建立 有效的安全防护策略，包括设备的使用、化学试剂的安全使用和处理丢弃、 感染性病原体和被污染材料的处置等。风险评估包含确定工作流程和鉴定 步骤中可能发生的化学和生物危害，以及降低风险的方法。 ?安全防护： 任何操作临床病原体样本或病原体的试验活动至少需要在二级生物安 全试验室(BSL — 2)中进展。MALDI— TOFMS 应安置在二级生物安全试验室内， 同时使用MALDI— TOF MS 检测临床病原体样本时除了需考虑生物危害的风 险外还要留意化学试剂的潜在风险。 人员培训与力量评估 各试验室应具备 MALDI— TOF MS 检测过程中涉及的全部操作人员的初 次培训和定期力量评估的程序文件，对涉及的全部操作人员应进展初次和 定期〔至少 6 个月一次〕的培训以及力量评估，培训考核需遵循制造商的使 用手册或试验室的标准操作规程，培训的内容包括原理方法、信息技术、 仪器维护、结果报告与解释等方面。此外，还应承受一组形态和生化特征 典型的菌株对培训者进展人员比对和 /或考核，以确保全部操作者鉴定结果 的全都性。通过培训，要求每位操作人员对每种病原体的鉴定结果必需达 到本试验室设定的每种病原体的最小结果阈值。保存全部培训、考核和能 力评估记录。 建议 1 对于临床常见细菌〔非高致病〕，操作人员的个人防护应按标准 预防要求，其病原体分别培育、蛋白提取及靶板点样时应在生物安全柜内 进展，点样后的靶板转移至 MALDI— TOFMS 分析过程中也需留意生物安全 防护；对潜在的含生物危害二类及以上的高致病病原体如布鲁菌、炭疽杆 菌、鼠疫耶尔森菌等的临床样本，试验室人员应请示医院感染治理部门并 尽量避开培育检测，必要状况下需要在生物安全柜内承受经灭活程序灭活 后再进展质谱分析。 建议 2 前期的样本处理过程中将会使用一些有机溶剂如乙醇、甲酸、 乙腈、三氟乙酸和基质液等，这些溶剂具有腐蚀性或可燃性，可引起人体 皮肤黏膜腐蚀、呼吸及循环系统功能紊乱、多脏器损伤，因此在试验的过 程中使用此类有机溶剂试剂时建议有一个良好的通风环境，同时需加强操 作人员的呼吸道、皮肤黏膜尤其是眼面部的个人防护。 MALD— TOF MS 病原体鉴定过程的质量保证 质量保证可确保 MALD— TOF MS 病原体鉴定结果的准确性和准时性， 其内容涵盖分析前、分析中和分析后。 〔一〕分析前 ?菌株预备： 全部菌株均承受颖培育 〔16 48 h〕的单个菌落，推举细菌承受血琼 脂平板培育，真菌承受沙保罗平板培育，冻存菌株传代两次后使用。 ?靶板点样： 先将质控菌株/蛋白标准品点在靶板相应孔位，再点待测菌落。点样时 应留意菌 量适当、厚度均匀，不行带有琼脂成分。 ?加基质液： 点样后参加基质液，应自然凉干。 ?特别病原体： 如分枝杆菌、丝状真菌和诺卡菌等需要通过蛋白提取法进展提取前处 理，包括使用甲酸、乙腈、破壁硅珠管等试剂耗材。具体处理过程建议参 考制造商供给的SOP 进展操作。 ?样本预备留意事项： (1)靶板点样参加基质液后，需完全枯燥形成结晶方可进展检测。  (2) 靶板预备完成后，如为细菌或酵母菌，需在 48 h 内完成检测；如为分枝杆 菌，需在 4 h 内完成检测；如曲霉菌等丝状真菌，需马上完成检测。 ( (二)分析中一般状况 MALD— TOF MS 检测可以得到以下几种鉴定结 (1) 咼 置信的鉴定结果； (2)多个鉴定结果，且每个结果的置信度相像； 定结果。 下， 果： (3)无鉴 ?结果推断： 当 MALDI— TOF MS 供给了高置信的结果时，无需对图谱进展检查和复 核； 而当消灭多个鉴定结果或无鉴定时，可能消灭以下问题： (1)低质量的 图谱导致无鉴定结果：需检查菌株和试剂耗材的质量、仪器性能状态以及 具体操作环节；(2)图谱质