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生物化学10的学习教案;10.1 半保留复制;DNA 复制是半保留复制;10.1.1 半保留复制的实验证据;10.1.2 半保留复制的意义;10.2 参与DNA生物合成的酶;10.2.1 DNA聚合酶; （1）模板指导酶 即需要打开的 DNA 单链作为模板才能合成子链。此酶催化的底物：必须是脱氧的核苷 5’-三磷酸（dATP、dGTP、dTTP和dCTP）； 只有当所有 4 种脱氧核苷三磷酸以及 DNA 模板存在时，才能实现 DNA 的合成。 ;;（2）需要引物 DNA 聚合酶Ⅰ只能将脱氧核苷酸加于已存在的DNA 或 RNA 链的 3’-羟基上，否则不能合成。 这是一个耗能反应，每合成一个核苷酸消耗 2 分子ATP。聚合反应是延着 5’→3’ 的方向进行。 ;（3）具有水解作用;大肠杆菌体内各聚合酶作用：;DNA 聚合酶 Ⅲ： 它至少由 8 种亚基组成。这种组装体使酶的催化能力、准确性大为提高。它紧紧地结合于模板，每秒钟聚合 1000 多个核苷酸。 许多亚基的功能目前还不清楚，已知催化活性位于α亚基， β亚基大约把酶的核心夹于模板上，从而提高全酶的工作能力， 3’→5’核酸外切酶活性位于ε亚基。聚合酶Ⅲ全酶形成一个对称的二聚体。这种结构使复制的先导链及后随链在全酶上同时、同方向合成。;真核生物的 DNA聚合酶;10.2.2 DNA分子的拓扑学变化和相关酶;10.2.2.1 解螺旋酶;10.2.2.2 DNA拓扑异构酶;10.2.2.3 单链DNA结合蛋白;10.2.3 引物酶（Primerase） 所有的 DNA 聚合酶都要求一个有自由 3’-OH 的引物来起始 DNA 的合成。这段 RNA 长 5-10 个核苷酸，由一种特异的 RNA 聚合酶合成，此酶称为引物酶。 ; 引物及引物酶的作用： 这与 DNA聚合酶 的高度忠实性复制分不开。 已知 DNA聚合酶具有 3 ’→5 ’ 的外切作用以校对复制中的错误核苷酸。也就是说聚合酶在开始形成一个新的磷酸二酯键前，总先要检查前一个碱基是否正确，这就决定了它不能从头开始合成。 因此先合成一段低忠实性的多核苷酸来开始 DNA 的合成，并以核糖核苷酸来标记是“暂时”的。这种高度精确的安排增加了 DNA 复制的复杂性，却保证了复制的忠实性。已知复制的误差率仅为十亿分之一至百亿分??一，即复制十亿到一百亿个碱基才可能出一个差错。 ;10.2.4 DNA连接酶 催化两条 DNA 单链连接起来或把单条 DNA 链闭合起来。 ;10.3 以DNA为模板合成DNA的过程;10.3.1 复制的起始;（2）接着danB 和 danC 等蛋白复合物进入 DNA 的熔解区形成前引物化复合物。 （3）前引物化复合物形成后，导致模板 DNA 双螺旋解链，解螺旋的 DNA部分被单链结合蛋白结合，保持伸展状态，形成单链模板。 （4）引物合成：接着，引物酶也结合于单链模板上开始合成 RNA 引物。 ; danA 蛋白结合时要求双螺旋 DNA 必须是负超螺旋状态，识别起始原点的 作用。 danB 蛋白是解螺旋酶，它催化由 ATP 推动的双螺旋 DNA 的解链。;10.3.2 复制的延伸;先导链和随后链同时同方向合成：;完整的随后链的形成：;半保留半不连续复制： DNA 复制时子链双链中有一条来源于母链，以 DNA 母链双链为模板合成子链时, 其中一条子链的合成是不连续的, 而另一条链的合成是连续的。;10.3.3 复制的终止;（3）复制的终止 复制具有终止（termination）位置。在大肠杆菌里，由于基因组是一环型 DNA，两个复制叉向前推移，最后在终止区相遇并停止复制。 ;10.4 DNA损伤与修复;10.4.1 DNA的损伤; 胸腺嘧啶二聚体: 紫外线引起 DNA 分子中同一条链上相邻的两个嘧啶核苷酸以共价键连接生成环丁烷结构，即嘧啶二聚体。最易见的是胸腺嘧啶二聚体。此种二聚体不能容纳在双螺旋结构中，它不能与互补链上的腺嘌呤形成氢键配对，影响 DNA 的复制和基因表达。;10.4.2 损伤修复系统; （1）光修复 光修复也称光复活，它是由可见光（300nm-400nm）激活 光复活酶 ，该酶能分解胸腺嘧啶二聚体。 已从细菌和一些动物的细胞中分裂出一种光复活酶。此酶与DNA形