羟苯磺酸钙治疗肾功能不全患者的稳态血药浓度检测.docxVIP

羟苯磺酸钙治疗肾功能不全患者的稳态血药浓度检测 氨基磺酸钙常用于改善微循环和抗血郁闭合物，包括一些肾功能不全的患者。这部分患者使用羟苯磺酸钙后肌氨酸氧化酶法血清肌酐大幅降低, 导致患者认为该药物有明显的改善肾功能作用 本研究借鉴血清羟苯磺酸钙高效液相色谱法 (HPLC) 测定的文献 1 1.1 病例选择选择标准 选择于2016年5～10月间黄石市第二医院收治服用羟苯磺酸钙剂量为1.5 g/d (Tid) 的患者30例。其中, 肾功能不全组:20例慢性肾脏病患者 (符合K/DOQI指南诊断标准) , 男性13例, 女性7例, 年龄56.6 (37～68) 岁, 入选标准:有肾功能不全 (血清酶法肌酐高于120 μmol/L) 。非肾功能不全组:本院收治非肾功能不全患者10例, 男性7例, 女性3例, 年龄54.3 (32～71) 岁, 入选标准:无肾功能不全 (血清酶法肌酐低于90 μmol/L) 。两组排除标准均为:有明显心、肺及肝功能障碍者, 发热及血液白细胞计数高于参考范围者, 未按规定剂量服药者。两组均采集患者羟苯磺酸钙服药5天后清晨空腹静脉血, 分离血清-40℃保存待测。本研究征得患者知情同意, 药物的使用仅依据病情的需要。 1.2 药品与试剂 仪器:岛津LC-20AT高效液相色谱仪, 八方世纪BF-2000氮气吹干仪, 上海精科雷磁PXSI-226离子计, sigma3K15离心机, 海门市其林贝尔仪器制造有限公司QL-901涡旋振荡器;美国ABBOTT公司ARCHITECT C8000全自动生化分析仪, 日本富士胶片株式会社FUJIFILM DRI-CHEM4000ie干式生化分析仪。 药品与试剂:口服羟苯磺酸钙为西安利君制药公司产品 (0.5g/粒) ;羟苯磺酸钙对照品 (含量94.8%, 批号:100573-201503) 购自中国食品药品检定研究院;对氨基苯甲酸对照品 (含量99.8%, 批号:100017-201210) 购自中国食品药品检定研究院;磷酸 (分析纯) 购自武汉市中天化工有限责任公司;磷酸二氢钾 (分析纯) 、四丁基氢氧化铵水溶液 (10%, 分析纯) 均购自国药集团化学试剂有限公司;乙腈 (高效液相色谱纯) 购自山东禹王实业有限公司化工分公司;水为二次去离子水;肌氨酸氧化酶法肌酐试剂购自浙江东瓯诊断产品有限公司;半胱氨酸蛋白酶抑制剂C (Cystatin C) 试剂购自宁波瑞源生物科技有限公司;脱亚胺酶法肌酐试剂购自日本富士胶片株式会社;质控品购自英国RANDOX公司;空白血清为未服药物且排除心、肝、肾等常见疾病的健康体检者混合血清。 1.3 方法 1.3.1 ods-sp柱 色谱柱:Inertsil ODS-SP柱 (5 μm, 4.6*250mm, 日本GL Sciences公司) , 保护柱ODS-SP柱 (5 μm, 4.0*10mm, 日本GL Sciences公司) ;流动相:0.05 mol/L pH 3.0磷酸二氢钾缓冲液-乙腈 (85∶15, v/v) , 流动相中含0.1 mg/dl四丁基氢氧化铵 1.3.2 标准储存液的配制 称取羟苯磺酸钙对照品200 mg (相当于羟苯磺酸钙189.6 mg) , 用100 ml容量瓶加去离子水至刻度溶解成标准储存液。用去离子水稀释标准储存液配成浓度为19.0, 37.9, 94.8, 189.6, 474.0, 948.0和1 896.0 mg/L的标准系列储存液;内标为对氨基苯甲酸, 用去离子水配成50 mg/L浓度的内标储存液。上述储存液4℃避光冷藏备用。 1.3.3 乙腈沉淀蛋白检测 吸取0.25 ml空白血清 (患者血清) 于2.5 ml具塞尖底塑料离心管中, 加入标准系列储存液 (去离子水) 25 μl, 加入内标储存液 (50 mg/L) 25 μl, 混匀后加入1 ml乙腈沉淀蛋白, 旋涡振荡1 min, 4 000 r/min离心10 min, 取上清液0.65 ml于试管中, 氮气吹干后加250 μl流动相溶解, 混匀后取20 μl进样分析。 1.3.4 萃取样品法 取94.8, 474.0, 1 896.0 mg/L标准系列储存液, 按“标准系列 (检测样品) 处理”法处理进样分析, 每种浓度平行做6份, 得到萃取后峰面积。另取上述标准系列储存液, 除用去离子水替换空白血清外, 其它按“标准系列 (检测样品) 处理”法处理, 每种浓度平行做2份, 取峰面积均值作为对照计算羟苯磺酸钙及内标萃取回收率。 1.3.5 标准系列浓度与检出限 取标准系列储存液按“标准系列 (检测样品) 处理”法分别处理并进样检测, 每种浓度重复测定2次取均值, 标准系列浓度分别为1.90, 3.79, 9.48, 18.96, 47.