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;循网络 串基础;内容索引;;1.基因工程的原理和技术;(2)双酶切法;2.转基因动物、植物及微生物的培育流程;提醒 (1)一般用同种限制性核酸内切酶切割载体和目的基因,实际应用双酶切法。
(2)DNA连接酶≠DNA聚合酶:DNA连接酶连接两个DNA片段,而DNA聚合酶只能将单个脱氧核苷酸添加到脱氧核苷酸链上。
(3)限制性核酸内切酶≠DNA酶≠解旋酶:限制性核酸内切酶是切割某种特定的脱氧核苷酸序列,并使两条链在特定的位置断开;DNA酶是将DNA水解为组成单位;解旋酶是将DNA的两条链间的氢键打开形成两条单链。;(4)启动子、终止子:启动子(DNA片段)≠起始密码子(RNA);终止子(DNA片段)≠终止密码子(RNA)。
(5)标记基因≠抗性基因:标记基因一般为抗生素抗性基因或荧光基因等,其作用是鉴别受体细胞中是否含有目的基因(或目的基因是否导入成功),从而将含目的基因的细胞筛选出来。
(6)将一个基因从DNA分子上切割下来,需要切两处,同时产生4个粘性末端。
(7)农杆菌转化法不是将农杆菌的重组质粒直接导入到植物细胞中,农杆菌易感染植物细胞,并将其Ti质粒上的T-DNA(可转移的DNA)转移并整合到受体细胞染色体DNA上。;(8)植物细胞的全能性较高,可经植物组织培养过程成为完整植物体,因此受体细胞可以是受精卵也可以是体细胞;动物基因工程中的受体细胞一般是受精卵。;3.有关质粒的四点认识
(1)从存在位置看——在细菌中独立于拟核之外。
(2)从化学成分上看——为双链环状DNA分子。
(3)从功能上看——能够自主复制。
(4)从结构上看——常含有抗生素抗性基因。;4.目的基因是否表达的检测;;判一判——常考误点快识别;(3)DNA连接酶能够将任意2个DNA片段连接在一起( )
提示 DNA连接酶把具有相同粘性末端的2个DNA片段连接在一起。
(4)抗虫基因即使成功地插入到植物细胞染色体上也未必能正常表达
( );想一想——漏点知识快补充;2.艾弗里等人的肺炎双球菌转化实验为证明DNA是遗传物质做出了重要贡献,也可以说是基因工程的先导,如果说他们的工作为基因工程理论的建立提供了启示,那么,这一启示是什么?
提示 艾弗里等人的肺炎双球菌转化实验中,S型菌的DNA可以使R型菌???生转化,说明可调控多糖荚膜产生的基因整合到了R型菌的DNA分子中并成功得以表达。也就是说DNA可以从一种生物个体转移到另一种生物个体并进行表达,这就为基因工程理论的建立提供了启示。;3.DNA连接酶和DNA聚合酶的作用相同吗?为什么?
提示 不相同。DNA连接酶连接的是两个DNA片段,而DNA聚合酶是把单个的脱氧核苷酸连接到已有的DNA片段上。DNA聚合酶催化的过程需要模板,而DNA连接酶不需要模板。
4.天然的DNA分子是否可以直接用作基因工程载体?为什么?
提示 不可以。具有能自我复制、有一个或多个限制性核酸内切酶切割位点、有标记基因及对受体细胞无害等特点的DNA分子才可以直接用作基因工程的载体。实际上天然的DNA分子一般不完全具备上述条件,往往需要进行人工改造后才能用于基因工程操作。;;命题点一 考查基因工程的工具
1.(2016·全国Ⅲ,40节选)图(a)中的三个DNA片段上依次表示出了EcoRⅠ、BamHⅠ和Sau3AⅠ三种限制性核酸内切酶的识别序列与切割位点,图(b)为某种表达载体的示意图(载体上的EcoRⅠ、Sau3AⅠ的切点是唯一的)。;解析 由于限制性核酸内切酶Sau3AⅠ与BamHⅠ切割后DNA形成的粘性末端相同,所以经BamHⅠ酶切割得到的目的基因可以与上述表达载体被Sau3AⅠ酶切后的产物连接。;(2)若某人利用图(b)所示的表达载体获得了甲、乙、丙三种含有目的基因的重组子,如图(c)所示,这三种重组子中,不能在宿主细胞中表达目的基因产物的有________,不能表达的原因是______________________
______________________________________________________________
_________。;解析 在基因表达载体中,启动子应位于目的基因的上游,终止子应位于目的基因的下游,这样目的基因才能表达。图中甲、丙均不符合,所以都不能表达目的基因的产物。;2.某质粒上有SalⅠ、HindⅢ、BamHⅠ三种限制性核酸内切酶切割位点,同时还含有抗四环素基因和抗氨苄青霉素基因。利用此质粒获得转基因抗盐烟草的过程,如图所示。请回答下列问题:
(1)将目的基因导入植物细胞,采用最多的方法是农杆菌转化法。其中用到的质粒是________,该质粒含有一段特殊的DNA片段,称为T-DNA。该方法中农杆菌的作用是_____________________________________
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