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钩吻素子在大鼠体内的药动学及组织分布 钩子，方程c。 1 材料和方法 1.1 材料表面 1.1.1 仪器、试药与仪器 钩吻素子由本实验室自闽产野生钩吻植物中提取, 纯度99.1%;甲醇 (色谱纯, 国药集团化学试剂有限公司) ;乙酸乙酯 (分析纯, 国药集团化学试剂有限公司) ;氨水 (汕头市西陇化工厂有限公司) 。高效液相色谱仪 (LC-20A, 日本岛津公司) ;电子分析天平 (BP310S型, 北京塞多利斯天平公司) ;氮气吹干仪 (HGC-24A型, 天津市恒奥科技发展有限公司) ;台式高速离心机 (TGL-16C型, 上海安亭科学仪器厂) ;旋涡混合仪 (WH-2微型, 上海沪西分析仪器厂) ;自动匀浆器 (Art-Miccra D-8型, 德国MICCRA公司) 。 1.1.2 动物损害测试 雄性SD大鼠, 6~7周龄, 体质量180~200g, 清洁级[上海斯莱克实验动物有限公司, 动物质量合格证号:SCXK (沪) 2007-0005]。实验前禁食12h, 不禁水。 1.2 方法 1.2.1 样品前处理及分组 血浆样品采集与预处理:大鼠6只, 灌胃给予15 mg/kg钩吻素子, 于给药后第5, 9, 12, 15, 30, 45, 60, 150, 240, 330和420min眼眶静脉取血约0.5 mL于肝素处理的试管中, 4 000r/min离心5 min, 取100μL血浆, 加5mol/L氢氧化钠溶液10μL调pH至10~12, 加1mL乙酸乙酯, 涡旋混匀5min, 10 000r/min离心10min, 取上清60℃氮气挥干, 残渣以100μL流动相复溶, 0.25μm微孔滤膜过滤, 取滤液10μL进样。 组织样品采集与预处理:大鼠18只, 随机分成3组, 每组6只。大鼠灌胃给予15 mg/kg钩吻素子, 3组大鼠分别于灌胃给药后第5, 15和60 min断头处死, 取肝、肾、肺、脑、睾丸、骨骼肌、胃、小肠、体脂、心、脾组织, 生理盐水冲洗 (其中小肠和胃需去除内容物) , 滤纸吸干, 称质量, 按1∶1 (W/V) 加入生理盐水冰浴匀浆, 取100μL匀浆液进行预处理, 方法同上述血浆样品的预处理。 1.2.2 血液和组织样品流动相 色谱柱:Amethyst C18柱 (150mm×4.6mm, 5μm) ;柱温:30℃。血液样品检测流动相:甲醇∶水∶氨水=55∶45∶0.05 (V/V) ;组织样品检测流动相:甲醇∶水∶氨水=45∶55∶0.05 (V/V) ;流速1.0mL/min。紫外检测波长:256nm。 1.2.3 专属性、线性关系、回收率和稳定性试验 为验证HPLC测定血浆样品钩吻素子含量的方法学, 进行专属性、线性关系及灵敏度、精密度、回收率和稳定性试验。为验证HPLC测定组织样品钩吻素子含量的方法学, 进行专属性、线性关系、精密度和回收率试验。 1.3 统计处理 数据采用ue0af±s表示。选用Kinetia 4.4药代动力学软件 (Thermo Electron公司) 计算药动学参数。 2 结果 2.1 hplc生物样品钩子含量的方法学证实 2.1.1 线性关系和定量限 本色谱条件下钩吻素子的保留时间为9.2 min, 血浆中的内源性物质对检测无干扰, 方法的专属性良好;在0.06~10.00μg/mL范围内线性关系良好 (表1) , 定量限为0.06μg/mL;钩吻素子0.08, 2.00和10.00μg/mL的日内和日间精密度RSD均9%, 钩吻素子0.08, 2.00和10.00μg/mL提取回收率为80.03%~83.55%, 方法回收率为99.21%~110.36%, 钩吻素子0.08, 2.00和10.00μg/mL室温、冻融和长期保存稳定性的测定结果变化均在允许范围内。 2.1.2 线性关系良好 本色谱条件下钩吻素子的保留时间为19.7min, 组织中的内源性物质对检测无干扰, 方法的专属性良好;在0.08~5.00μg/mL范围内线性关系良好 (表1) ;钩吻素子0.08, 1.00和5.00μg/mL的日内和日间精密度RSD均8%, 钩吻素子0.08, 1.00和5.00μg/mL提取回收率为64.20%~76.82%, 方法回收率为91.87%~109.25%。 2.2 药代动力学分析 钩吻素子的血药浓度-时间曲线见图1。大鼠单次灌胃给予15mg/kg钩吻素子, 约15min后钩吻素子血药浓度达峰;随后血药浓度迅速下降, 而在灌胃给药1h后血药浓度下降缓慢。经Kinetica 4.4药代动力学软件分析处理, 以AIC最小原则为指标, 结果表明灌胃给予钩吻素子在大鼠体内药动学符合二室模型 (权重W为1) , 其主要药物动力学参数如下:计算的达峰时间为 (19.