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淀粉、蔗糖和葡萄糖的灌胃服用 龙眼是广西著名的药物食品。它被用作治疗喉咙痛、咳嗽、上腹痛和肠道疾病的药物。中医临床上用于治疗高血压,肺结核,哮喘等多种呼吸系统,消化系统疾病 1 材料和方法 1.1 实验材料 1.1.1 降糖、降糖和血清胰岛素试剂盒 鲜罗汉果皂苷和干罗汉果皂苷样品,由桂林集琦实力天然物科技有限公司提供新鲜罗汉果和干罗汉果制备;阿卡波糖又名降糖平,杭州中美华东制药有限公司,批号:101202;血糖测定试剂盒,四川迈瑞生物科技股份有限公司,批号:0311011;血清胰岛素试剂盒,美国RD公司,批号:201107;其它试剂均为分析纯。 1.1.2 动物 昆明种小鼠,由广西中医学院实验动物中心提供,动物合格证号:桂医动字第11004号。雌雄兼用,体重20~24 g。 1.1.3 仪器、设备和常用设备 DT-100型电子天平,美国双杰兄弟(集团)有限公司;Tu-1901双光束此外可见分光光度计,北京普析通用仪器有限公司;120 mm×0.9~1.1 mm玻璃毛细管,四川成都华西医科大学仪器厂;16K(16000 r/m)台式离心机,珠海黑马医学仪器有限公司;HH-8数显恒温水浴锅,常州国华电器有限公司;1000μL、10μL移液器,芬兰大龙医疗设备上海有限公司;酶标仪(TECAN)等。 1.2 实验方法 1.2.1 罗地亚磺酸的制备 鲜罗汉果皂苷与干罗汉果皂苷的含量见表1。 1.2.2 给药剂量及给药方案 取昆明种小鼠一批,根据小鼠空腹血糖值随机分为组,10只/组。实验设置淀粉负荷(6.0 g/kg)、蔗糖负荷(4.0 g/kg)、及葡萄糖负荷(2.0 g/kg)三种不同糖源组,各糖源负荷组下设空白对照组、糖源对照组、阳性对照组(降糖平0.01 g/kg)、鲜罗汉果皂苷高剂量组(1.00 g/kg)、鲜罗汉果皂苷中剂量组(0.50 g/kg)、鲜罗汉果皂苷低剂量(0.25 g/kg)组、干罗汉果皂苷高剂量组(1.00 g/kg)、干罗汉果皂苷中剂量组(0.50g/kg)、干罗汉果皂苷低剂量组(0.25 g/kg),各组动物以20 m L/kg容量灌胃给予相应药物,空白对照组和糖源对照组仅灌胃生理盐水。淀粉负荷组及葡萄糖负荷组分别在给药第1 d后30 min及连续给药7 d后30min灌胃服用淀粉或葡萄糖,考察药物对淀粉或葡萄糖引起血糖变化的影响;蔗糖负荷组给药一次后灌胃服用蔗糖,考察药物对蔗糖引起血糖变化的影响。 1.2.3 动物血糖及血糖源检测 实验开始时各组小鼠均禁食不禁水12 h,之后于眼眶后静脉丛取血,置37℃恒温水浴锅中10 min,待血液凝固,以3000 r/min离心10 min,分离血清,取血清10μL,按葡萄糖试剂盒(GOD-PAP)的操作步骤与方法,于505 nm处测定溶液吸光度(OD值),计算血糖值,即为空腹血糖值(0 h)。根据小鼠空腹血糖值,将动物随机分为为淀粉负荷、蔗糖负荷、及葡萄糖负荷三种不同糖源组,各糖源负荷组下设置不同给药方式的亚组。各组动物灌胃药30 min后立即以灌胃方式分别进食淀粉、蔗糖及葡萄糖三种糖源,空白对照组仅以相同方式灌胃给予生理盐水。分别于进食后30、60、120 min,于眼眶后静脉丛取血,离心分离血清,测定血糖浓度。以时间为横坐标,各时点血糖值为纵坐标,制作血糖应答曲线;并以糖源对照组血糖应答曲线下面积为100,按以下公式计算血糖生成指数(GI)。 1.2.4 血清胰岛素水平 实验分组同1.2.1。各组动物连续给药7 d,末次给药30 min后灌胃服用淀粉(6 g/kg),服用淀粉后60 min于眼眶后静脉丛取血,置37℃恒温水浴锅中10 min,待血液凝固,以3000 r/min离心10 min,分离血清,以酶联免疫法(ELISA)测定血清胰岛素水平。 1.2.5 整体酶解环氧化法检测总糖苷5.2m 配制0.1 M p H 6.9的磷酸缓冲液,以磷酸缓冲液溶解α-葡萄糖苷酶溶液、对硝基酚α-D吡喃葡萄糖苷、鲜罗汉果皂苷及干罗汉果皂苷,在96孔微量板中预先加入80μL的鲜罗汉果皂苷(浓度范围0.63~80mg/m L),或干罗汉果皂苷(浓度范围0.04~10 mg/m L)及20μLα-葡萄糖苷酶溶液(终浓度1 U/m L),同时设样品对照组(以磷酸缓冲液代替酶溶液)、正常对照组(以磷酸缓冲液代替罗汉果皂苷)及空白组(以磷酸缓冲液代替酶溶液和罗汉果皂苷),各组平行设三个重复;反应体系于37℃下温浴5 min,之后加入100μL对硝基酚α-D吡喃葡萄糖苷(终浓度4 m M),37℃温浴10 min,采用酶标仪测定405 nm的吸光值。计算出各浓度下两种罗汉果皂苷样品对α-葡萄糖苷酶活性的抑制率,并计算酶活性抑制的半数有效浓度(IC 2 结果与讨论 2.1 干罗汉果皂苷