DB37_T 3880-2020鸭疫里默氏杆菌病诊断技术规程.pdf

ICS11.220B 41DB37山東东省地電方标准DB37/T3880—2020鸭疫里默氏杆菌病诊断技术规程Diagnostic techniques for Riemerella Anatipestifer infection2020-03-16发布2020-04-16实施山东省市场监督管理局发布 DB37/T 3880—2020附录A（规范性附录）试剂的配制A. 1PBS (0. 01 mo1/L, pH 7. 2)氯化钠8. 00 g氯化钾0. 2 ml磷酸二氢钾0. 2 ml磷酸氢二钠2. 89 g硫柳汞0. 1 g去离子水加至1000 ml100 kPa 15 min火菌，置4℃冰箱保存备用。A. 210X TE羟基甲基氨基甲烷（Tris）12. 11 g乙二胺四乙酸二钠3. 72 g水800 mlHC1调 PH 至 8.0水加至1000 ml100kPa15min灭菌后备用。A. 320% SDS十二烷基硫酸钠20 g水80 ml.HC1调 PH 至 7. 2水加至100 nLA.41.0%琼脂糖凝胶琼脂糖1.0 g1XTAE电泳缓冲液加至100 ml加热完全融化，待冷至50℃60℃时，加Goodview溶液5μL，摇匀，倒入电泳板上，凝固后取下梳子，备用。A. 550×TAE缓冲液羟基甲基氨基甲烷（Tris）242. 0 g DB37/T 3880—2020冰乙酸57. 1 ml0.5mo1/L乙二胺四乙酸二钠溶液（PH8.0）27. 5 ml.灭菌去离子水加至1000 ml2 ℃~8 ℃保存。8 DB37/T 3880—2020附录B（规范性附录）培养基的配制B.1血清培养基琼脂牛肉膏0.5 g蛋白陈1. 0 g氯化钠0. 5 g琼脂粉1.0 g去离子水加至100mL，100kPa20min灭菌，待冷却到50℃60℃时加入5mL无菌鸡血清。置4℃冰箱保存备用。B. 2麦康凯培养基麦康凯粉末50 g琼脂粉10 g去离子水加至1000nL，100kPa15min灭菌，置2℃~8C冰箱保存备用。9 DB37/T 3880—2020附录C(资料性附录)PCR结果电泳图M112m说明：1——阳性质控：2——明性质控：3一—空白对照：M——DL.2000 DNA分子量标准图C.1PCR结果电泳图10 DB37/T 3880—2020附录D（规范性附录）荧光定量PCR扩增示意图2.7002.4002.1001.8001.500SYBR Green I 1.2000.9000.6000.3000.000230.004.008.0012.0016.0020.0024.0028.0032.0036.0040.0aplo说明：一阳性质控；2一—阴性质控：3一一空白对照。图D.1荧光定量PCR扩增示意图 DB37/T 3880—2020前言本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由山东省畜牧兽医局提出并组织实施。本标准由山东省畜牧业标准化技术委员会归口。本标准起草单位：山东省农业科学院家离研究所、山东省动物疫病预防与控制中心、威海市备牧业发展中心、临沂市备牧发展促进中心。本标准主要起草人：黄兵、李玉峰、马秀丽、于可响、宋敏训、赵国清、秦卓明、刘存霞、林树乾陈静、谭善杰、郭效珍、赵巧雅。1 DB37/T 3880—2020鸭疫里默氏杆菌病诊断技术规程1范围本标准规定了鸭疫里默氏杆菌病的临床诊断、细菌分离、病原核酸检测和综合判定的技术要求，本标准适用于鸭疫里默氏杆菌病的诊断与检测。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件，凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件，GB4789.28食品安全国家标准食品微生物学检验培养基和试剂的质量要求GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法GB 19489实验室生物安全通用要求NY/T 541兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范3临床诊断3.1流行病学该病一年四季均可发生，鸭、鹅、野生水禽和火鸡均可发病，1周龄~8周龄鸭高度敏感，5周龄以下死亡较快，较大的可能存活时间较长，该病在种鸭中少见，3.2临床症状3.2.1最急性型很少出现明显症状即突然死亡。3.2.2急性型常见于2周龄～3周龄的维鸭，病程1日～3日。惠鸭精神沉郁、嗜睡、厌食、离群、不愿走动或行动退缓，眼鼻分泌物增多，患鸭呼吸困难、缩颈或以喙抵地，濒死期出现神经症状呈角弓反张、抽描等3.2.3慢性型常见于4周龄7周龄鸭，病程可达一周以上。主要表现为精神沉郁、庆食、腿软弱无力、不愿走动、伏卧或呈犬坐姿势，共济失调、控事性点头或头左右摇摆，难以维持驱体平衡，部分病例头颈叠斜，当遇到惊扰时呈转圈运动或倒退，部分患鸭跛行。