乙醇胺致突变性研究.docxVIP

乙醇胺致突变性研究 乙醇胺具有氨基和氨基酸两个功能基团。这是氨基醇中最重要的产品之一。不仅自身用途广泛, 还是很多重要有机衍生物的前体物质, 可用于农药、医药、化工等领域 1 材料和方法 1.1 材料表面 1.1.1 gractor 乙醇胺, CAS号为141-43-5, 购自Gracia Chemical Technology公司, 纯度99.5%, 批号:201206169。本品外观为无色透明液体。 1.1.2 动物中心iiic屏障系统饲养 SPF级昆明种小鼠50只, 雌雄各半, 体重为25~30 g, 由四川省医学科学院实验动物研究所提供, 合格证号:SCXK (川) 2008-28。四川大学华西公共卫生学院实验动物中心IVC屏障系统饲养, 动物房使用合格证:SCYK (川) 2011-011。实验前检疫3 d。整个实验过程中, 动物自由摄食和饮水, 室温20~23℃, 相对湿度60%~65%。 1.1.3 对于细胞菌和育种条件 小鼠淋巴瘤细胞L5178Ytk 1.1.5 聚合物ct、甲磺酸甲酯mms、丙酮酸钠、丙酮酸钠、丙酮酸钠、丝裂霉素b、c、n-二羟基 次黄嘌呤、甘氨酸、甲氨蝶呤、胸腺嘧啶核苷、三氟胸苷 (TFT) 、甲磺酸甲酯 (MMS) 、丙酮酸钠、2, 4, 7-三硝基-9-芴酮、叠氮钠、丝裂霉素C、2-氨基芴和1, 8-二羟基蒽醌, 均购自美国Sigma公司。 1.2 方法 1.2.1 沙门氏菌回归试验 方法和结果判定参考GBZ/T 240.8-2011 1.2.2 大鼠骨髓热爱多感染红细胞微测试 方法和结果判定参考GBZ/T 240.36-2011 1.2.3 平均每孔接种细胞数 方法和结果判定参考GBZ/T 240.10-2011 式中:n———平均每孔接种细胞数:在计算PE时n=1.6, 计算MF时n=2 000;EW———无集落生长的孔数;TW———为总孔数。 1.3 统计方法 采用SPSS 17.0和PEMS 3.0《中国医学百科全书·医学统计学》统计软件包 (第三版) 软件进行统计学分析。 2 结果 2.1 乙醇胺回复突变试验 由表1可知, 各菌株不同阳性对照回复突变菌落数均远超自发突变菌落数, 试验体系可靠。在剂量50.0μl/皿时, 由于乙醇胺的碱性过强, 未有菌落产生。在10.0μl/皿时, 加或不加S9的情况下, 乙醇胺诱发TA97、TA100菌株的回复突变菌落数均超过自发突变的两倍以上, 且随着剂量增加呈现剂量-反应关系, 表明乙醇胺对TA97和TA100菌株具有诱变作用。重复试验结果相同。 2.2 小鼠的微核试验结果 结果提示受试物在小鼠骨髓细胞微核试验中为阳性结果 (表2) 。因最高剂量组, 即1 375.0 mg/kg组小鼠在两次给药之后, 死亡率高达70%, 故不再对其微核结果进行分析。阳性对照组的微核率显著高于阴性对照组 (P0.01) , 各组PCE/NCE比值均在正常范围内且差异无统计学意义, 表明试验体系可靠。乙醇胺雄鼠低、中两组以及雌鼠中剂量组的微核率与阴性对照组比较均显著性升高, 差异具有统计学意义 (P0.01) 。 2.3 体外染色试验 随着浓度增加, 各剂量组的相对存活率 (RS) 、相对悬浮生长 (RSG) 、相对总生长 (RTG) 逐渐下降, 呈现良好的剂量-反应关系, 表明受试物在较高剂量下可抑制L5178Y细胞的生长。但由于乙醇胺水溶液具有强碱性, 染毒完成时细胞死亡比例过大, 最高染毒剂量10 mmol/L乙醇胺的RSG和RS难以达到要求的20%以内。 阳性对照组MF显著高于阴性对照组 (P0.05) , 表明试验系统可靠。MF有随剂量增加而增加的趋势, 但各剂量组MF与阴性对照比较, 差异均无统计学意义 (P0.05) , 表明在受试物在本实验条件下, 在检测剂量范围内无明显诱导L5178Y细胞TK基因杂合性丢失的作用 (表3) 。 3 致死剂、减化剂和其他非整倍体诱变剂的致突变性研究 Ames试验、微核试验和TK基因突变试验是美国环境保护署 (EPA) 和经济合作与发展组织 (OECD) 所推荐的遗传毒性检测试验组合, 能够较为全面和准确地筛查诱变物。乙醇胺是一种有着较长工业产龄的有机化合物, 常用于生产表面活性剂、除草剂、木材防腐剂、气体净化剂、金属加工液和水泥磨料等工业领域。20世纪时乙醇胺的毒理学资料便在国外得到了一个较为完整的归纳 Ames试验中TA97和TA98菌株主要可检出移码突变, TA100和TA102菌株主要可检出碱基置换和移码突变;微核试验可检测断裂剂和部分非整倍体诱变剂 2011年, 我国乙醇胺年产量已接近15万吨, 但仍无法满足其日益增长的需求, 乙醇胺的产量将快速增长, 生产规模也将继续扩大。由于生产工艺不同和生产使用