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小儿消食片遗传毒性评价 儿童消费品是中国药物的一个品种。具有消食、健脾、胃和胃的功效。它用于食欲不振、胃胀、腹胀、面部变黄、肌肉瘦等症状。 遗传毒性评价是药物非临床安全性评价的重要内容, 在预测化合物的潜在致癌性和可遗传突变方面具有重要应用价值。本实验根据药物遗传毒性研究技术指导原则规定 1 材料表面 1.1 测试剂 小儿消食片 (批号1601016) , 0.3 g/片, 由山东宏济堂制药集团股份有限公司提供。所用试剂均为分析纯。 1.2 实验动物使用许可证 中国仓鼠肺细胞购自中国科学院上海生命科学研究院, 经检测无支原体感染。昆明种小鼠, SPF级, 体质量25~30 g, 由北京维通利华实验动物技术有限公司提供, 实验动物生产许可证号SCXK (京) 2012-0001, 实验动物使用许可证号SYXK (鲁) 2014-0008。组氨酸缺陷型鼠伤寒沙门菌TA97a、TA98、TA100、TA102、TA1535购自美国Moltox公司, 经生物学鉴定符合试验要求。 1.3 菌落生长菌株 E100生物显微镜 (日本尼康公司) ;LMQ.C立式灭菌器 (山东新华医疗器械股份有限公司) ;YLN-50A菌落计数器 (北京誉朗诺科技有限公司) ;HFsafe-1500TE生物安全柜 (上海力申科学仪器有限公司) 。 2 方法 2.1 中国仓细胞外染色体畸形试验 通过细胞毒性试验结果、细胞半数生长抑制浓度 (6、24、48 h内IC 2.2 大鼠骨髓热爱多感染红细胞微测试 根据药物遗传毒性研究技术指导原则, 若供试品LD 2.3 最高剂量设计 通过平皿掺入法, 选择组氨酸缺陷型鼠伤寒沙门氏菌TA97a、TA98、TA100、TA102、TA1535, 分别采用直接法、代谢活化法。预试验结果表明, 不加S9代谢活化系统时, 小儿消食片各剂量组对TA98、TA100无显著抑菌作用, 回变菌落数与阴性对照组相比无显著性差异 (P0.05) , 故正式试验中最高剂量设为5 000μg/皿。每一菌株设5个剂量组, 每组3个平皿, 质量浓度分别为5 000、2 500、1 250、625、312.5μg/皿, 同时设阴性对照组 (灭菌注射用水) 和阳性对照组 (不加S9混合液时, TA97a、TA98用2, 4, 7-三硝基-9-芴酮, 剂量为0.2μg/皿, 或用4-硝基喹啉-N-氧化物, 剂量为0.5μg/皿;TA100、TA1535用叠氮钠, 剂量为1.5μg/皿;TA102用注射用丝裂霉素, 剂量为0.5μg/皿。加S9混合液时, TA97a、TA98、TA100用2-氨基芴, 剂量为50μg/皿;TA102用1, 8-二羟基蒽醌, 剂量为50μg/皿;TA1535用注射用环磷酰胺, 剂量为200μg/皿) 。平皿置于37℃生化培养箱内培养, 48 h后观察计数。 2.4 表示“ue0afs” 通过DAS1.0软件进行统计学处理, 数据以 (ue0af±s) 表示。P0.05表示具有显著性差异, P0.01表示具有极显著性差异。 3 结果 3.1 染色体畸变试验 表1显示, 在1.25~5.0 mg/m L下作用6 h (±S9) , 1.0~4.0 mg/m L下作用24 h, 0.625~2.5 mg/m L下作用48 h时, 染色体畸变数均5%, 而且未呈现剂量反应关系, 结果判定为阴性。 3.2 小鼠骨髓细胞造血功能测定 表2显示, 小儿消食片各剂量组给药后于26、46 h采样时, PCE/ (PCE+NCE) 与阴性对照组比较均无显著性差异 (P0.05) , 表明对骨髓细胞的造血功能没有产生抑制作用, 同时微核率亦然 (P0.05) , 表明对小鼠骨髓细胞无致微核作用, 结果判定为阴性。 3.3 两组常范围内,阳性对照组显著降低 表3显示, 在有或无S9活化系统的条件下, 阴性对照组中各试验菌株的回复突变菌落数均在正常范围内, 而阳性对照组显著更高 (P0.01) ;小儿消食片在312.5~5 000μg/皿剂量范围内无明显抑菌作用, 回变菌落数与阴性对照组比较无显著变化 (P0.05) , 未呈现浓度依赖性增加, 表明无诱导鼠伤寒沙门氏菌基因突变作用, 结果判定为阴性。 4 遗传毒性评价 遗传毒性研究是药物非临床安全性评价的重要环节, 与致癌性研究、生殖毒性研究均有着密切联系 染色体畸变是外源化学物作用于机体或培养细胞后所引起的最常见遗传物质损伤之一 本实验采用遗传毒性评价标准试验组合方法, 分别从动物水平、染色体水平、基因水平综合评价小儿消食片遗传毒性, 发现该制剂在本试验条件下无潜在遗传毒性, 安全性良好。今后, 将对小儿消食片中槟榔有效成分槟榔碱的毒性进行深入研究, 并制订其含有量限度, 为该制剂临床应用提供更全