SN_T 1151.3-2013斑节对虾杆状病毒(MBV)检疫技术规范.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1151.3—2013代替SN/T1151.3--2002斑节对虾杆状病毒病（MBV)检疫技术规范Quarantine protocol for infection with Penaeus monodon-type baculovirus2013-08-30发布2014-03-01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局 SN/T 1151.3—2013前言SN/T1151共分为6部分：第1部分：虾桃拉综合征检疫技术规范；第2部分：对虾白斑病检疫技术规范；第3部分：斑节对虾杆状病毒病（MBV)检疫技术规范；-第4部分：虾黄头病检疫技术规范；一第5部分：对虾杆状病毒(BP)检验方法；一第6部分：对虾白斑病毒斑点杂交和原位杂交检测操作规程。本部分为SN/T1151的第3部分。本部分按照GB/T1.1--2009给出的规则起草。本部分代替SN/T1151.3-2002《斑节对虾杆状病毒诊断方法》。本部分与SN/T1151.3一2002相比，除编辑性修改外主要技术变化如下：增加了湿片法；一细化了组织切片技术；-PCR方法中的引物变为更为敏感的两对嵌套式引物。本部分参考了OIE水生动物诊断手册2006版第2.3.5章中推荐的斑节对虾杆状病毒的湿片法、组织切片法和PCR检测方法。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分起草单位：中华人民共和国深圳出人境检验检疫局、深圳市检验检疫科学研究院。本部分主要起草人：高隆英、兰文升、景宏丽、冯东岳、王红英、江育林。本部分所代替标准的历次版本发布情况：-SN/T1151.3---2002。I SN/T 1151.3-2013斑节对虾杆状病毒病(MBV)检疫技术规范1范围SN/T1151的本部分规定了斑节对虾杆状病毒病（Penaeusmonodon-typebaculovirus，MBV）的检测方法，对粪便的湿片检测可针对亲虾的初筛检测。组织切片和PCR方法结合可作为确诊的检疫方法。本部分适用于斑节对虾杆状病毒病的诊断和鉴定，适用于该病的流行病学调查、检疫和监测。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3缩略语下列缩略语适用于本文件。MBV：斑节对虾杆状病毒（Penaeusmonodon-typebaculovirus)DEPC：焦碳酸二乙酯（diethypyrocarbonate）Taq酶：TaqDNA聚合酶(Taq DNA polymerase)dNTP：脱氧核糖核苷三磷酸（deoxyribonucleosidetriphosphate）EDTA：乙二胺四乙酸（(ethylenediaminetetraaceticacid)Tris：三（羟甲基）氨基甲烷（tris（hydroxymethyl)aminomethane）PCR：聚合酶链式反应（polymerasechainreaction）DavisonsAFA：戴维斯固定液4仪器和设备4.11石蜡组织切片机。4.2组织脱水机（使用手工脱水的缸）。4.3、石蜡包埋机。4.4切片染色机（使用手工染色所需的缸）。4.5展片所用水浴锅。4.6烘片机。4.7正置显微镜。4.8载玻片，盖玻片等常规组织切片用具。4.9，冷冻离心机。4.10一80℃超低温冰箱。1 SN/T 1151.3—20134.11—20℃普通冰箱。4.12PCR仪。4.13微量移液器及吸头。4.14电泳仪。4.15凝胶成像仪或紫外透射仪。5试剂和材料所用试剂除特殊规定外均为分析纯。5.1水：应符合GB/T6682中一级水的规格5.2Davisons固定液（见附录A的A.1）。5.3石蜡（熔点52℃～54℃）：切片级。5.4无水乙醇。5.5二甲苯。5.6盐酸。5.7氢氧化钠。5.8苏木素染色液（见A.2)。5.9伊红染色液（见A.3）。5.10黏片剂（见A.4）。5.11蛋白酶K。5.12饱和酚。5. 13三氯甲烷。5.14Tag酶：一20℃保存，避免温度剧烈变化5.15引物：MBV1. 4F5-CGA-TTG-CAT-ATC-GGC-CGA-ATA-3MBV1.4R5°-TTG-GCA-TGC-ACT-CCC-TGA-GAT-3扩增MBV核酸中的533bp片段。MBV1. 4NF5-TCC-AATfCGC-GTC-TGC-GAT-ACT-3MBV1.4NR5-CGC-TAA-TGG-GGC-ACA-AGT-CTC-3°则从533bp片段中再扩增361bp片段。5.16 DNA Marker 2000。5.17琼脂糖。6诊断方法6.1MBV湿片法6.