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高效液相色谱法测定不同浓度的多环芳烃 作为一种强致癌性化合物，多环芳烃（pahs）主要来源于非复发或过度食用的正常食用油。 目前建立的食用油中单一或多个PAHs的快速筛查方法主要涉及两方面内容：前处理方法和仪器分析方法。仪器分析方法包括液相色谱-荧光检测法（LC-FLD）、气相色谱-氢火焰离子化检测法（GC-FID）、气相色谱-质谱法（GC-MS）和液相色谱-质谱法（LC-MS）等 目前，脂肪酶酶解技术主要应用于营养成分分析，如脂肪酸及各种维生素的检测，在食品添加剂及有毒有害物质检测方面应用甚少。本工作根据这4种PAHs的多环结构和食用油基质中高脂肪含量的特点，前处理采用专一性酶解法处理样品，采用高效液相色谱-荧光检测法（HPLC-FLD）对样品提取液中BaA、BbF、BkF和BaF等4种PAHs的含量进行了测定，以期为提高政府监管部门的监管工作效率，保证食品安全提供了基础。 1 试验部分 1.1 单标准储备溶液和标准溶液的配制 LC-20AT型高效液相色谱仪，配荧光检测器；Milli-Q型高纯水发生器；SF-40R型冷冻离心机；TKA型漩涡振动器；Hei-VAP Expert型旋转蒸发仪；DK-S28型电热恒温水浴锅；0.22μm尼龙滤膜。 单标准储备溶液：取0.01g单标准品，用二氯甲烷溶解，转移至10mL的容量瓶中，用乙腈稀释至刻度，得到1.0g·L 磷酸盐缓冲溶液：0.108g·mL 混合标准溶液：称取4种PAHs的单标准储备溶液各10μL，用乙腈定容至10.0 mL，配制成1.0mg·L 混合标准溶液系列：称取适量混合标准溶液，用乙腈稀释至刻度，配制0,0.1,0.5,1.0,2.0,5.0μg·L BaA、BbF、BkF和BaF的纯度不小于95%；脂肪酶的酶活性大于700U·mg 正己烷、乙腈、二氯甲烷、乙醇均为色谱纯；其他试剂为分析纯；试验用水为超纯水（电阻率18.2ΩM·cm）。 动物油、植物油和煎炸油等3种常见食用油来自国家残留监控抽样和进出口送检企业。 1.2 显示工作条件 1.3 脂肪酶解碳酸钾3g 称取2.0g样品，依次加入5mL磷酸盐缓冲溶液（pH 8.0）和0.2g脂肪酶，恒温（37±2）℃振荡酶解2h。加入1.0g碳酸钾，5mL乙醇，涡旋混匀。在提取溶液中加入15 mL正己烷，5 mL水，振荡5min，以4 500r·min 2 结果与讨论 2.1 铬行为 按照仪器工作条件，对5.0μg·L 2.2 脂肪酶用量及酶解时间对残余油脂除油率的影响 针对食用油特殊基质成分和4种PAHs的弱极性性质，试验采用专一性脂肪酶处理样品，缓冲溶液选择磷酸二氢钾缓冲溶液（pH 8.0），整个酶解过程温度控制在（37±2）℃，此条件可以在保证酶活性的同时，又可以降低基质中脂肪的干扰。皂化反应经常用来去除油脂，其通常在浓碱环境下进行（氢氧化钾或氢氧化钠等强碱性化合物），但在此环境中，待测化合物的结构极易被破坏，且有机相中残留的强碱性化合物需多次水洗才可以消除，不可避免的造成待测化合物的损失、检测时间的加长和检测成本的增加。因此，本工作采用碳酸钾进行皂化反应，碳酸钾不仅可以提供弱碱性环境和终止酶解反应，还可以皂化油脂，确保最大的除油率，除油率（X）可通过测量氮吹充分后残余油脂的精确质量值计算： 式中：m 脂肪酶用量以及酶解时间都与除油率相关联。试验考察了脂肪酶用量分别为0.05,0.1,0.2,0.5,1.0g，酶解时间分别为1.0,2.0,3.0,5.0h时对动物油、植物油和经用于煎炸的食用油（煎炸油）等3种常见食用油除油率的影响。 由图2可知：当脂肪酶用量为0.05g和0.1g时，除油率受酶解时间影响较大，此时，酶解时间大于等于2.0h的除油率较1.0h的明显增加，但均低于80%；当脂肪酶用量大于0.1g时，酶解时间2.0h的除油率明显高于1.0h的，但2.0,3.0,5.0h的除油率差别很小。从节约时间和成本的角度出发，试验选择脂肪酶用量为0.2g，酶解时间为2.0h。 试验还考察了碳酸钾用量分别为0,0.5,1.0,2.0g时对除油率的影响。 由图3可知：当碳酸钾的用量不大于1.0g时，除油率随着碳酸钾用量的增加而增加；当碳酸钾用量为1.0g时，除油率达到最大区间（98.1%～99.8%）；碳酸钾用量为2.0g时，除油率反而降低，推测可能是由于过量的碳酸钾造成了过碱环境，破坏了酶的活性进而降低了除油效率。因此，试验选择碳酸钾的用量为1.0g。 2.3 影响较大较 萃取前，在待皂化的样品溶液中加入适量乙醇可以有效防止乳化现象的发生，此外，乙醇还能起到预萃取的作用。同时，4种PAHs属于弱极性化合物，萃取剂正己烷的用量对其回收率的影响较大。因此，试验考察了乙醇用量分别为2.5,5,10,15mL，正己烷用量分别为1