SNT 2351-2009出入境口岸军团菌检验规程.pdf

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 2351—2009出入境口岸军团菌检验规程Examination codes of legionella at frontier port2009-07-07发布2010-01-16实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局 SN/T 2351--2009前言本标准的附录 B为规范性附录,附录 A、附录 C、附录 D为资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国深圳出人境检验检疫局、中华人民共和国珠海出人境检验检疫局。本标准主要起草人：朱玉兰、吴兵、高朝贤、朱海、杨泽、叶健忠、古莉冰、刘志明。本标准系首次发布的出人境检验检疫行业标准。 SN/T 2351—2009出入境口岸军团菌检验规程1 范围本标准规定了出人境口岸军团菌检验对象、方法、结果报告、生物安全要求及阳性结果判定、处置。本标准适用于出人境口岸军团菌的检验。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是未注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB19489实验室　生物安全通用要求WS195军团病诊断标准及处理原则3术语和定义下列术语和定义适用于本标准。3. 1军团病 legionnariresdisease,LD军团菌属(主要是军团菌)引起的细菌性呼吸道传染病,临床表现有两种类型:非肺炎型和肺炎型。3. 2军团菌 legionella引起军团病的病原菌,系兼性细胞内寄生的革兰阴性杆菌,军团菌是人军团病的主要致病菌。4　实验室生物安全防护实验室结构和设施、安全操作规程、安全设备及个体防护应符合GB19489中二级生物安全防护实验室的要求。5 对象5.1疑似感染军团菌的出人境人员。5.2＇环境污染标本。6 准备6.1检验试剂6.1.1细菌培养鉴定及聚合酶链反应(PCR)试剂的制备参见附录 A，或购买符合要求的商品化检测试剂盒。6.1.2直接荧光抗体染色（DFA）、血清学检验及尿抗原检测见WS195或购买符合要求的商品化试剂。6.2仪器设备仪器设备参见附录 A。1 SN/T 2351—20097标本的采集和处理7.1疑似感染者标本的采集7.1.1发病期患者的痰液、纤支镜毛刷标本、支气管灌洗液和肺组织可进行病原学检测，常规采样后立即送检，采样过程中应使用无菌蒸馏水。7.1.2无菌方法采集发病期患者胸水，用有盖无菌试管保存，立即送检。7.1.3用于培养的尿液标本采样前应清洗并消毒患者尿道口，留取中段尿 10 mL～20 mL于无菌容器中,立即送检。用于尿抗原检测的标本可常规留取中段尿。7.1.4用不抗凝的真空管采集并保存患者急性期（发病 3 d内）、第 3 周、第 6 周血清用于血清学检测。7.2疑似感染者标本的处理7.2.1肺组织用蒸馏水在无菌条件下制成悬液，痰液、纤支镜毛刷标本、支气管灌洗液、肺组织悬液经酸处理或热处理后进行培养（见7：韦）。7.2.2无菌方法采集的胸水、消毒尿道口留取的中段尿、血液等正常情况下无菌的标本无需处理直接用于培养。3. 0007/min离心5min,分离出血清。7.2.3血清学试验的血液采集后室温放置 1h..7.3环境污染标本采集500mL,尘土和泥土用无菌蒸馏水制成悬液。水样中如果含有含水样用无菌容器采集200mL氯或其他氧化剂，应在取样时或取样前加人硫代硫酸钾或相应的非活性试剂中和。从样品采集、浓缩到送检间隔不超过2d，实验室接到水样后应尽快进行微生物学分析。7.4环境污染标本处理7.4.1膜过滤法0.22 μm 的膜。过滤后的膜应放置采用膜过滤装置进行膜过滤,采用直径 47 mm47 mm,州的无菌稀释液或无菌蒸馏水，不断摇动至少2 min。在带盖的无菌容器中，可用无菌剪刀剪碎,加15 nf也可将容器放人超声波中10 min7.4.2离心法mL容积的离心瓶中，600b;r/min离心10min 或3000r/min离取200mL样品于300mL～500心30min，保持温度在15℃～2℃,奔去上清液,将沉淀物悬浮在15mL无菌蒸馏水中。7.5酸处理和热处理7.5.1处理目的支气管灌洗液和肺组织液等正常情况有菌的标本和环境污染标本为减少痰液、纤支镜毛刷标本、中的杂菌生长，标本需进行酸处理或热处理。同之容器内的标本只能选择酸处理或热处理中的一项，两种处理方法不能重复。7.5.2酸处理取患者痰液、纤支镜毛刷标本、支气管灌洗液和肺组织悬液等标本2 mL，转移至有盖无菌试管中。取经7.4处理过的环境污染标本10mL，转移至有盖无菌试管中，3000r/min离心30min，用无